[发明专利]人源化单克隆抗体、其制备方法及其用途

权利要求书

1.编码抗人CD20人源化单克隆抗体SH006-2的核酸分子，其特征在于包含编码轻链的核苷酸序列和编码重链的核苷酸序列；编码轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，编码重链的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.权利要求1的核酸分子，其在编码轻链的核苷酸序列和编码重链的核苷酸序列的5’端分别包含编码信号肽的核苷酸序列；在编码轻链的核苷酸序列和编码重链的核苷酸序列的3’端分别包含终止密码子。

3.权利要求2的核酸分子，其中所述信号肽由氨基酸序列SEQ ID NO:6组成。

4.重组载体，其包含权利要求1-3任一项的核酸分子，其中所述核酸分子与一种或多种调节元件可操作连接。

5.重组细胞，其含有权利要求4所述的重组载体。

6.根据权利要求5所述的重组细胞，所述重组细胞为敲除负责编码岩藻糖基转移酶8即FUT8的基因的CHO细胞。

7.根据权利要求6所述的重组细胞，所述敲除是指利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将CHO细胞中编码FUT8的基因敲除。

8.一种抗人CD20人源化单克隆抗体SH006-2的制备方法，其特征在于，所述单克隆抗体SH006-2由权利要求1-3任一项所述的核酸分子、权利要求4所述的重组载体或者权利要求5所述的重组细胞制备得到，并且所述抗体的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，其重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述制备方法包括在使得所述抗人CD20人源化单克隆抗体SH006-2表达的条件下培养权利要求5所述的重组细胞，并收集所表达的抗体SH006-2。

9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将权利要求1-3任一项所述的核苷酸序列克隆入表达载体中，得到重组表达载体；

2)将重组表达载体转入宿主细胞，即负责编码岩藻糖基转移酶8即FUT8的基因被敲除的CHO细胞中，得到重组细胞；

3)在筛选培养基上对重组细胞进行加压筛选，得到稳定生长的细胞池；

4)从步骤3)的细胞池中筛选高表达细胞株，然后检测单克隆上清中SH006-2的表达水平，筛选培养得到表达量较高的克隆，扩增培养后冻存细胞备用；

5)取步骤4)获得的克隆细胞于目标培养基中培养，检测抗体表达产量；然后挑选出表达高的克隆进行培养，获得高表达的单克隆细胞株，收获培养上清并纯化，得权利要求8所述的抗人CD20人源化单克隆抗体SH006-2。

10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述敲除是指，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将CHO细胞中负责编码岩藻糖的基因即FUT8基因敲除。

11.权利要求1-3任一项所述的核酸分子或权利要求4所述的重组载体或者权利要求5-7任一项所述的重组细胞在权利要求8所述的抗人CD20人源化单克隆抗体SH006-2的制备方法中的用途。