[发明专利]miRNA-340靶基因结合序列、重组质粒及其应用有效

专利信息
申请号: 201810706843.1 申请日: 2018-07-02
公开(公告)号: CN108998451B 公开(公告)日: 2021-03-05
发明(设计)人: 阮庆国;边江;刘芮伶;王绍文;耿雯雯 申请(专利权)人: 深圳先进技术研究院
主分类号: C12N15/113 分类号: C12N15/113;C12N15/63;C12N1/19;C12N5/10;C12N15/66;C12Q1/6876
代理公司: 深圳中一联合知识产权代理有限公司 44414 代理人: 李艳丽
地址: 518000 广东省深圳市*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: mirna 340 基因 结合 序列 重组 质粒 及其 应用
【权利要求书】:

1.一种miRNA-340靶基因结合序列,其特征在于,所述miRNA-340靶基因结合序列应用于检测miRNA-340对IL-17A基因调控作用,其中,所述序列为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7。

2.一种重组质粒,其特征在于,该重组质粒包括如权利要求1所述的miRNA-340靶基因结合序列。

3.根据权利要求2所述的重组质粒,其特征在于,所述重组质粒从5’端至3’端依次包括如下元件:启动子序列、报告基因、如权利要求1所述的miRNA-340靶基因结合序列和终止序列。

4.根据权利要求3所述的重组质粒,其特征在于,该重组质粒包括荧光素酶报告基因质粒pmir-GLO和所述miRNA-340靶基因结合序列,所述miRNA-340靶基因结合序列位于所述荧光素酶报告基因质粒的NheI酶切位点和XhoI酶切位点之间。

5.一种宿主细胞,其特征在于,该宿主细胞含有如权利要求2-4任一项所述的重组质粒。

6.一种如权利要求4所述的重组质粒的构建方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:

以小鼠基因组DNA为模板,以(i)SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示核苷酸序列或(ii)SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示核苷酸序列或(iii)SEQ ID No.11和SEQ ID No.12所示核苷酸序列或(iv)SEQ ID No.13和SEQ ID No.14所示核苷酸序列或(v)SEQ ID No.15和SEQ ID No.16所示核苷酸序列为引物,进行PCR扩增;

将PCR扩增所得序列连接至荧光素酶报告基因质粒pmir-GLO的多克隆位点。

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