[发明专利]miRNA-340靶基因结合序列、重组质粒及其应用有效
申请号: | 201810706843.1 | 申请日: | 2018-07-02 |
公开(公告)号: | CN108998451B | 公开(公告)日: | 2021-03-05 |
发明(设计)人: | 阮庆国;边江;刘芮伶;王绍文;耿雯雯 | 申请(专利权)人: | 深圳先进技术研究院 |
主分类号: | C12N15/113 | 分类号: | C12N15/113;C12N15/63;C12N1/19;C12N5/10;C12N15/66;C12Q1/6876 |
代理公司: | 深圳中一联合知识产权代理有限公司 44414 | 代理人: | 李艳丽 |
地址: | 518000 广东省深圳市*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | mirna 340 基因 结合 序列 重组 质粒 及其 应用 | ||
1.一种miRNA-340靶基因结合序列,其特征在于,所述miRNA-340靶基因结合序列应用于检测miRNA-340对IL-17A基因调控作用,其中,所述序列为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7。
2.一种重组质粒,其特征在于,该重组质粒包括如权利要求1所述的miRNA-340靶基因结合序列。
3.根据权利要求2所述的重组质粒,其特征在于,所述重组质粒从5’端至3’端依次包括如下元件:启动子序列、报告基因、如权利要求1所述的miRNA-340靶基因结合序列和终止序列。
4.根据权利要求3所述的重组质粒,其特征在于,该重组质粒包括荧光素酶报告基因质粒pmir-GLO和所述miRNA-340靶基因结合序列,所述miRNA-340靶基因结合序列位于所述荧光素酶报告基因质粒的NheI酶切位点和XhoI酶切位点之间。
5.一种宿主细胞,其特征在于,该宿主细胞含有如权利要求2-4任一项所述的重组质粒。
6.一种如权利要求4所述的重组质粒的构建方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:
以小鼠基因组DNA为模板,以(i)SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示核苷酸序列或(ii)SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示核苷酸序列或(iii)SEQ ID No.11和SEQ ID No.12所示核苷酸序列或(iv)SEQ ID No.13和SEQ ID No.14所示核苷酸序列或(v)SEQ ID No.15和SEQ ID No.16所示核苷酸序列为引物,进行PCR扩增;
将PCR扩增所得序列连接至荧光素酶报告基因质粒pmir-GLO的多克隆位点。
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