[发明专利]一株耐盐拮抗菌M4-1及其菌剂的制备和应用

权利要求书

1.一种耐盐广谱抗菌的菌株，其特征在于：所述的菌株是保藏编号为CGMCC No.15774、保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)M4-1。

2.一种M4-1微生物菌剂，其特征在于：是由权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌M4-1发酵得到的菌剂。

3.M4-1微生物菌剂在抑制立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）、假禾谷镰刀菌（Fusarium pseudograminearum）、小麦根腐平脐蠕孢菌（Bipolaris sorokiniana (Sacc.) Shoemaker）、胶胞炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）中的应用，所述M4-1微生物菌剂是由权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌M4-1发酵得到的菌剂。

4.如权利要求2或3所述的M4-1微生物菌剂的制备方法，其特征在于：步骤如下：

1)菌种活化：将低温保存的甲基营养型芽孢杆菌M4-1于LB固体培养基平板上划线，32℃培养24～36h；挑取M4-1菌株单菌落再次划线转接于LB固体培养基平板上，32℃培养16～24h；

所述LB固体培养基组分为：蛋白胨10 .0g，酵母粉5 .0g，NaCl 10.0g，琼脂15.0g，水1.0L；

2)一级种子液制备：用接种环刮取2环步骤1)活化后的M4-1菌株菌苔，接种于一级种子液培养基中，32℃，200～220r/min，摇瓶培养16h得到一级种子液；

3)二级种子液制备：将步骤2)制得的一级种子液按照二级种子培养基体积比1～2％接种到种子罐中发酵培养；转速120r/min，温度32℃，通气量1:1～1:1.2，发酵罐压强0.05-0.06MPa，培养12-16h，作为二级种子液；

4)发酵培养：将步骤3)所得二级种子液按照体积比10％接种到发酵培养基中发酵培养；转速120r/min，温度32℃，通气量1:1～1:1.2，发酵罐压强0.05～0.06MPa，培养时间为20～30h，得到M4-1微生物液体菌剂；

5)固体菌剂制备：将步骤4)获得的M4-1微生物液体菌剂，6000～8000r/min离心20～30min，去除离心上清液，向沉淀物中缓慢加入硅藻土或玉米粉作为载体基质，加入硅藻土或玉米粉的量为液体菌剂重量的6～8％，搅拌均匀后进行喷雾干燥，65℃通过雾化器的分散和180℃高温空气迅速蒸干，经旋风分离器收集料液中的固体物质，即得M4-1微生物固体菌剂；

所述一级种子液培养基组分为：蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，水1.0L；

所述二级种子培养基组分为：玉米粉25.0g，蔗糖10.0g，黄豆饼粉10.0g，磷酸二氢钾4.0g，硫酸铵4.0g，硫酸镁2.5g，水1 .0L；

所述发酵培养基组分为：玉米粉25.0g、蔗糖10.0g、黄豆饼粉10.0g、磷酸二氢钾4.0g，硫酸铵4.0g，硫酸镁2.5g，水1.0L。

5.如权利要求2或3所述的M4-1微生物菌剂的使用方法：其特征在于：液体菌剂按照2～3L/亩的用量，使用时与水按照体积比1:100混合均匀，灌根施用；

固体菌剂按照1.0～2.0kg/亩的用量，拌种或加适量水稀释后灌根施用。

6.如权利要求2或3所述的M4-1微生物菌剂在制备生物有机肥或复合微生物肥料中的应用。