[发明专利]一株耐盐拮抗菌M4-1及其菌剂的制备和应用

说明书

本发明涉及一株耐盐拮抗菌M4‑1及其菌剂的制备和应用；保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15774；该菌株具有较高的耐盐性，能够在盐碱土壤中稳定定殖；能够在液体水溶肥、固体水溶肥中存活并保持较高存活率；该菌株具有较广的抗菌谱，利用该菌株制备的菌剂对引起小麦、玉米、蔬菜和果树等作物根腐类病害及其他土传病害具有较好的防治效果；该菌株发酵性状优异，菌剂的制备工艺简单、成本低，利于工业化生产和运输。

技术领域

本发明提供一株耐盐拮抗菌M4-1及其菌剂的制备和应用，属于农用微生物技术领域。

背景技术

盐碱土壤最主要的特征是可溶性盐分和代换性钠的含量较多，当土壤含盐量超过0.1％或土壤pH值在8.0以上，钠碱化度(ESP)大于或等于5％时，就属于盐碱土的范围。土地盐碱化属于土地荒漠化的一种，是土地退化中的最大难题，可导致土壤肥力下降，表现为土壤的通气、透水性和保水、保肥性降低，造成作物根系吸水困难，减产甚至绝产。

我国盐碱地面积巨大，盐碱土壤的理化性质较差、生态环境恶劣，土壤微生物的数量和种类明显少于正常的种植土壤，因此，盐碱地区的植被成活率和农业生产效率较低，严重影响农、林生产。

世界各国一直在积极地进行盐碱地治理和改良方面的研究和实践工作，盐碱地改良的主要方式有修建排水网、种植耐盐植物、培肥地力和添加化学物质等。土壤微生物是土壤系统中极其重要和最为活跃的部分，在土壤有机物的降解、矿化释放无机元素，营养物质转化，系统稳定性及抗干扰能力中居于支配地位，控制着土壤生态系统功能的关键过程，被认为是表征土壤质量变化最敏感、最有潜力的指标。因此，适合的微生物肥料产品能够有效调理土壤生态，提高土壤质量，实现对土壤的有效改良。

耐盐微生物能够有效疏松土壤，提高土壤透气、贮水能力，改良土壤理化性质，促进土壤酸碱平衡，改善根际微生物群落结构。耐盐微生物与有机肥、矿物肥、控释肥等肥料混合，提高肥料利用率，节约资源，降低成本，调理土壤结构，提高作物产量与品质。耐盐拮抗菌可以有效抑制土壤中病原菌的数量或杀死病原菌，对改善土壤生态环境，促进作物生长，抑制病害发生具有多重作用。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一株耐盐拮抗菌M4-1及其菌剂的制备和应用，可用于盐碱地小麦、玉米、蔬菜和果树等作物土传病害的防治和调理土壤环境。

发明人从黄河三角洲盐碱地小麦根际土壤中分离获得一株耐盐广谱性拮抗细菌；该菌株已于2018年5月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。保藏号为CGMCCNo.15774。分类命名：甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)M4-1；该菌株的16S rDNA序列如SEQ.NO.1所示，gyrB序列如SEQ.NO.2所示，rep-PCR基因指纹图谱如图3所示。

本发明还提供了一种利用甲基营养型芽孢杆菌M4-1制备微生物菌剂的方法，步骤如下：

(1)菌种活化：将低温保存的甲基营养型芽孢杆菌M4-1于LB固体培养基平板上划线，32℃培养24～36h；挑取M4-1菌株单菌落再次划线转接于LB固体培养基平板上，32℃培养16～24h，备用。

所述LB固体培养基组分为：蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，琼脂15.0g，水1.0L。

(2)一级种子液制备：用接种环刮取2环步骤(1)活化后的M4-1菌株菌苔，接种于一级种子液培养基中，32℃，200～220r/min，摇瓶培养16h得到一级种子液。

所述一级种子液培养基组分为：蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，水1.0L。