[发明专利]一种白藤梨根抗肿瘤活性物质的筛选及提取方法

权利要求书

1.一种白藤梨根抗肿瘤活性物质的筛选方法，其特征在于该白藤梨根抗肿瘤活性物质的筛选方法包括以下步骤：

⑴预处理：取一定量的白藤梨根药材，烘干后高速粉碎机粉碎，过药筛得到颗粒均匀的白藤梨根粉末；

⑵制备石油醚提取物：称取适量白藤梨根粉末，量取一定体积的石油醚浸泡白藤梨根粉末，超声提取后将白藤梨根药渣与提取液分离，提取液用滤纸过滤后，用旋转蒸发仪减压浓缩，得到石油醚提取物；

⑶制备乙酸乙酯提取物：将步骤⑵中超声提取后的白藤梨根药渣在烘箱中烘干，挥干残余的溶剂，烘干后的药渣置于一定体积的乙酸乙酯中浸泡，浸泡后的白藤梨根药渣用乙酸乙酯为溶剂采用渗漉法提取，药渣待用，渗漉液用滤纸过滤后在旋转蒸发仪中减压浓缩，得到乙酸乙酯提取物；

⑷制备乙醇提取物：将步骤⑶中渗漉提取后的白藤梨根药渣经烘箱烘干溶剂，加入一定体积的乙醇浸泡，浸泡后的白藤梨根药渣用乙醇为溶剂采用渗漉法提取，渗漉液用滤纸过滤后在旋转蒸发仪中减压浓缩，得到乙醇提取物；

⑸活性评价：采用RTCA DP实时细胞分析系统进行体外抗肿瘤实验，检测以上三种提取物对肿瘤细胞活性的影响，根据实验结果筛选出抗肿瘤效果最佳的提取物。

2.根据权利要求1所述的一种白藤梨根抗肿瘤活性物质的筛选方法，其特征在于所述的三种提取物中乙酸乙酯提取物中所含抗肿瘤活性物质含量最高，对肿瘤细胞抑制作用明显，乙酸乙酯提取物对人肝癌HepG2细胞有显著抑制作用，IC₅₀为7.6μg/mL；对人肺癌A549细胞有抑制作用，IC₅₀为150μg/mL。

3.根据权利要求1或2所述的一种白藤梨根抗肿瘤活性物质的筛选方法，其特征在于所述抗肿瘤效果最佳的提取物是乙酸乙酯提取物，其中的活性成分为三萜类化合物。

4.根据权利要求1所述的一种白藤梨根抗肿瘤活性物质的筛选方法，其特征在于所述步骤⑸中选用的肿瘤细胞为人肺癌A549细胞、人肝癌HepG2细胞中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的一种白藤梨根抗肿瘤活性物质的筛选方法，其特征在于所述步骤⑸的具体操作为：取对数生长期的肿瘤细胞，胰酶消化后制成单细胞悬液，调整细胞浓度为5×10⁴个/mL，先在E-Plate板上每孔放入50μL培养基测基线，随后加入100μL细胞悬液，置于37℃、5％CO₂培养箱中培养24h，记录细胞指数(CI)；设正常对照组、0.2％DMSO对照组、三种提取物试验组，每组设3复孔，培养24h后，三组提取物试验组分别用一定浓度提取物处理细胞，继续培养72h，记录CI值，筛选对肿瘤细胞抑制作用较好的样品进行200、100、50、25、12.5、6.25μg/mL6个浓度的CI值检测，计算IC₅₀。

6.一种白藤梨根抗肿瘤活性物质的提取方法，其特征在于该白藤梨根抗肿瘤活性物质的提取方法包括以下步骤：

⑴预处理：取一定量的白藤梨根药材，烘干后高速粉碎机粉碎，过药筛得到颗粒均匀的白藤梨根粉末；

⑵石油醚分离：称取适量白藤梨根粉末，量取一定体积的石油醚浸泡白藤梨根粉末，超声提取后将白藤梨根药渣与石油醚提取液分离，将白藤梨根中所含极性很小的成分分离开，以便提高后续提取纯度；

⑶制备乙酸乙酯提取物：将步骤⑵中超声提取后的白藤梨根药渣在烘箱中烘干，挥干残余的溶剂，烘干后的药渣置于一定体积的乙酸乙酯中浸泡，浸泡后的白藤梨根药渣用乙酸乙酯为溶剂采用渗漉法提取，渗漉液用滤纸过滤后在旋转蒸发仪中减压浓缩，得到乙酸乙酯提取物。

7.根据权利要求6所述的一种白藤梨根抗肿瘤活性物质的提取方法，其特征在于所述步骤⑵具体操作为：称取白藤梨根粉末10g～1000g，加入5倍量(溶剂体积与药材重量比)的石油醚浸泡30min后，超声提取2次，每次30min，合并提取液，分离出白藤梨根药渣。

8.根据权利要求6所述的一种白藤梨根抗肿瘤活性物质的提取方法，其特征在于所述步骤⑶具体操作为：将步骤⑵中的白藤梨根药渣经烘箱65℃烘干，挥干溶剂，加入5倍量(溶剂体积与药材重量比)的乙酸乙酯浸泡12h，用10倍量(溶剂体积与药材重量比)的乙酸乙酯渗漉提取，渗漉速度为2mL/min，收集渗漉液，合并后滤纸过滤，旋转蒸发仪中减压浓缩，减压浓缩的条件为压力150mbar，温度39℃，回收溶剂，得到乙酸乙酯提取物，得率为0.72％～1.08％。