[发明专利]自体脂肪干细胞共培养促进外周血造血干细胞增殖方法

权利要求书

1.自体脂肪干细胞共培养促进外周血造血干细胞增殖方法，其特征在于，包括：

取人脂肪间充质干细胞经过原代分离培养和传代培养后，进行无血清化，获得多代培养的无血清培养液和多代培养的传代干细胞；

合并多代培养的传代干细胞，离心收集得到干细胞上清液；并且，合并所述多代培养的无血清培养液，得到合并培养液；

将所述合并培养液和所述细胞上清液混合，再与无血清培养液混合，作为外周血干细胞培养基进行培养，以进行自体脂肪干细胞共培养促进外周血造血干细胞增殖。

2.如权利要求1所述自体脂肪干细胞共培养促进外周血造血干细胞增殖方法，其特征在于，所述无血清化，包括：

取传代培养的P3-P30代人脂肪间充质干细胞，利用细胞生长培养液培养至细胞80％融合时，弃去其中所述细胞生长培养液；

用磷酸盐缓冲液洗涤细胞两次，加入无血清培养液培养72小时；

收集得到多代培养的无血清培养液和多代培养的传代干细胞。

3.如权利要求2所述自体脂肪干细胞共培养促进外周血造血干细胞增殖方法，其特征在于，所述细胞生长培养液为无血清MSCM培养液。

4.如权利要求1所述自体脂肪干细胞共培养促进外周血造血干细胞增殖方法，其特征在于，所述传代培养中所使用的消化液为0.05％胰蛋白酶-0.25％EDTA混合消化液。

5.如权利要求4所述自体脂肪干细胞共培养促进外周血造血干细胞增殖方法，所述消化液的配制方法，包括：

取0.25g胰蛋白酶粉、20mgEDTA粉末和100ml 0.01mol/L的PBS；

用PBS溶解胰蛋白酶粉，然后将EDTA粉末和其余的PBS加入混合后，置于37℃水浴中，待彻底溶解液体呈透明为止；

用G5抽滤，分装置于4℃冰箱中保存即得到所述消化液。

6.如权利要求1所述自体脂肪干细胞共培养促进外周血造血干细胞增殖方法，所述“将所述合并培养液和所述细胞上清液混合，再与无血清培养液混合，作为外周血干细胞培养基进行培养，以进行自体脂肪干细胞共培养促进外周血造血干细胞增殖”包括：

将所述合并培养液和所述细胞上清液混合后，进行过滤，得到人脂肪间充质干细胞提取物；

将所述人脂肪间充质干细胞提取物与无血清培养液按照预设比例进行混合，作为外周血干细胞培养基进行培养，以进行自体脂肪干细胞共培养促进外周血造血干细胞增殖。

7.如权利要求6所述自体脂肪干细胞共培养促进外周血造血干细胞增殖方法，所述预设比例为1:1。

8.如权利要求6所述自体脂肪干细胞共培养促进外周血造血干细胞增殖方法，所述“将所述合并培养液和所述细胞上清液混合后，进行过滤，得到人脂肪间充质干细胞提取物”包括：

将所述合并培养液和所述细胞上清液混合后，通过0.45μm孔径的微孔滤膜过滤，得到上清液滤液；

将所述上清液滤液进行除菌处理，得到所述人脂肪间充质干细胞提取物。

9.如权利要求8所述自体脂肪干细胞共培养促进外周血造血干细胞增殖方法，所述“将所述上清液滤液进行除菌处理，得到所述人脂肪间充质干细胞提取物”包括：

将所述上清液滤液通过0.22μm的微孔滤膜过滤，制备得到所述人脂肪间充质干细胞提取物。