[发明专利]人造皮肤的制造方法及人造皮肤

说明书

一实现例提供一种人造皮肤的制造方法，该方法包括以下步骤：通过对成纤维细胞及胶原蛋白进行混合而形成仿真皮层；在所述仿真皮层上应用角质形成细胞后进行培养；在第一培养基中培养所述仿真皮层，所述第一培养基为角质形成细胞培养基；及将在所述第一培养基中培养的仿真皮层在混合DMEM培养基及F12培养基而成的第二培养基中进行培养。

技术领域

本记载涉及一种制造人造皮肤的方法。本记载具体提供一种产生色素沉着的人造皮肤的制造方法。此外，本记载提供一种人造皮肤，所述人造皮肤包括角质形成细胞及黑色素形成细胞。

背景技术

皮肤为覆盖身体外部的器官，从外面由表皮、真皮和皮下脂肪层这三层构成。在表皮中，中层鳞状上皮的角质形成细胞占大部分。由胶原纤维和弹性纤维等基质蛋白质来构成的真皮位于表皮之下，真皮具有血管、神经和汗腺等。皮下脂肪层由脂肪细胞来构成。皮肤通过如上所述各种细胞和构成物质的相互作用来保持其形状，并且起到调节体温的功能及作为对外部环境的屏障的功能等各种功能。

人造皮肤(artificial skin)为利用皮肤细胞及皮肤构成物质即胶原蛋白及弹性蛋白等来三维重构如上所述皮肤的的物质，其由存活的成纤维细胞和角质形成细胞来构成并且表现出与实际皮肤相似的结构及功能特征，因此还称为皮肤仿形体(skin equivalent或reconstructed skin)。人造皮肤为一种主要在弹力、强度及物质渗透等方面上与皮肤表现出相似的物理性质的高分子复合物，区别在于人造皮肤不会表现出与皮肤同样的生命现象。人造皮肤不仅用于取代烧伤或外伤等受损的皮肤(永久性植入型)或这种皮肤的再生(暂时包覆型)，而且在皮肤生理研究、皮肤刺激评价及皮肤功效评价等多种领域中得到应用。

诱导了色素沉着的人造皮肤模型例如可用于评价化妆品的美白效果。皮肤的色素沉着主要是表皮内黑色素的存在引起的，黑色素由位于表皮基底层的树枝状细胞—黑色素形成细胞来合成。先前已知的色素沉着人造皮肤采用以下方法来获得：将角质形成细胞和黑色素形成细胞分别分开培养后，对其进行共播种(co-seeding)并培养，从而诱导表皮层的发达。

发明内容

要解决的技术问题

在形成表皮层时，将角质形成细胞和黑色素形成细胞分别分开培养后对其进行共播种(co-seeding)的方法可能会导致人造皮肤制造过程的复杂化。此外，由于实质上难以设定能够一起培养角质形成细胞和黑色素形成细胞的培养条件，因此黑色素细胞不能完整地存在于最终的人造皮肤模型中，具有难以起到作为正常的色素沉着人造皮肤模型的功能的问题。

因此，一实现例的人造皮肤的制造方法旨在提供一种人造皮肤，该方法通过仅使用角质形成细胞来制造表现出色素沉着的人造皮肤，从而提供进一步接近色素沉着的实际皮肤而仿形的人造皮肤。

技术方案

一实现例提供一种人造皮肤的制造方法，该方法包括以下步骤：通过对成纤维细胞及胶原蛋白进行混合而形成仿真皮层；在所述仿真皮层上应用角质形成细胞后进行培养；在第一培养基中培养所述仿真皮层，所述第一培养基为角质形成细胞培养基；及将在所述第一培养基中培养的仿真皮层在混合DMEM培养基及F12培养基而成的第二培养基中进行培养。

所述角质形成细胞可包括黑色素形成细胞的干细胞。

所述第二培养基可包括用于诱导所述黑色素形成细胞的干细胞分化的成分。

将所述第一培养基可设置为与所述仿真皮层的底面相接，并且使与设置有所述第一培养基的表面相反的表面暴露在空气中。

可在结束所述第一培养基中的培养步骤后直接进行所述第二培养基中的培养步骤。

在所述第一培养基中的培养期和在所述第二培养基中的培养期合计可为20天内。

在所述第一培养基中的培养期可以等于或长于在所述第二培养基中的培养期。