[发明专利]一种三明野生黄精无菌体系建立与芽诱导的方法

说明书

本发明属于植物组织培养技术领域。具体涉及三明野生黄精无菌体系建立与组织培养的方法。依次包括以下步骤：(1)三明野生黄精外植体准备：取当年冬季和来年春季两季的三明野生黄精块茎为外植体，按节间长短切成小块，进行消毒接种；(2)三明野生黄精外植体消毒试剂的准备；(3)三明野生黄精外植体消毒前处理；(4)三明野生黄精的消毒与接种；(5)三明野生黄精不定芽诱导培养基；(6)三明野生黄精污染情况统计及出芽个数统计。采用本发明方法，能够快速获得三明野生黄精的不定芽，利于产业化生产。

技术领域

本发明涉及三明野生黄精无菌体系建立与芽诱导，属于植物组织培养技术领域，主要应用于三明野生黄精无菌体系建立与组织培养。

背景技术

三明市地处闽中西部，主要以山地为主,海拔分布从50-1857.7米,属中亚热带海洋性季节气候、年平均温度15～19℃，气候及海拔高度非常适宜黄精属植物的生长。黄精（Polygonatum cyI'toD．erlla Hua）属于百合科（Liliaceae）黄精属（Polygonatum）具肉质根状茎多年生药用草本植物，俗称野生姜、山生姜。其主要生物学特性为横生，宿存，呈圆柱状、连珠状或不规则姜块状，直径0.5-3.5 cm，有节，年久者肥大，节膨大或不膨大，节间长或短，粗细均匀或一头粗一头细，不分支或少分支，表面浅黄色至黄褐色，茎痕呈圆盘状，中心常略有凹陷；根茎含有黄精多糖、甾体皂苷、蒽醌类化合物和生物碱、木脂素、维生素及多种对人体有用的氨基酸等种物质，能增强机体的免疫、延缓衰老、抗菌、抗病毒和降脂、降糖作用。故其为兼具食用、药用和观赏价值的经济植物，具有广阔的开发利用前景。但由于其黄精生长周期长，种子繁殖至少5年以上才能收获，块茎繁殖也至少需要3年，仅靠野生资源做为原料来生产药品远不能满足整个医药市场的需求。因此，建立更加高效的无菌体系和芽诱导培养基的筛选是目前黄精快速繁殖的重要突破口。

发明内容

本发明的目的在于提供三明野生黄精无菌体系建立与芽诱导，采用植物组织培养技术，通过无菌体系建立中各影响因子的筛选和培养基配方的优化，获得低污染率，较高芽诱导率的三明野生黄精无菌体系建立与芽诱导方法。本方法操作步骤简便、可缩短三明野生黄精正常情况下块茎的生长年限，缩短黄精繁殖周期，为工厂化育苗提供参考。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种三明野生黄精无菌体系建立与芽诱导方法，包括以下步骤：

(1)三明野生黄精外植体准备；

(2)三明野生黄精外植体消毒试剂的准备；

(3)三明野生黄精外植体消毒前处理；

(4)三明野生黄精的消毒与接种；

(5)三明野生黄精不定芽诱导培养基筛选；

(6)三明野生黄精污染情况统计及出芽个数统计。

采用植物组织培养技术，对先对三明野生黄精块茎用洗衣粉在自来水下冲洗过夜，在用多菌灵浸泡2 d，能明显降低三明野生黄精块茎外植体初代培养污染率，采用6-BA浓度 4.0 mg/L能有效提高黄精块茎芽诱导率。

具体方法为：

步骤(1)三明野生黄精外植体准备的方法为：取冬季12月与春季3月的野生黄精块茎进行外植体活力对比试验，将冬季野生黄精去除须根，春季野生黄精去除须根和地上叶。选表面浅黄色至黄褐色，生活力较强的地下块茎为外植体，洗去块茎表面的泥土，尤其是黄精块茎节间部分拨开分段仔细清洗，进行不同预消毒处理。

步骤(2)三明野生黄精外植体消毒试剂的准备方法为：a、配制1wt%HgCl₂母液，稀释成0.2wt%的浓度备用；b、采用多菌灵粉末配制3wt%多菌灵溶液，作为消毒前外植体灭菌试剂备用。