[发明专利]一种农杆菌介导的大白菜转基因方法

权利要求书

1.一种农杆菌介导的大白菜转基因方法，其特征在于，所述方法包括：用含有待转基因的农杆菌侵染液侵染大白菜籽苗的带柄子叶。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大白菜籽苗的带柄子叶的制备方法包括：将大白菜种子培养4天，获得籽苗，再将籽苗从子叶柄部切下，切去生长点，并带有1-2mm子叶柄。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述培养使用的培养基包括含20g/L蔗糖和7g/L琼脂粉的1/2MS培养基。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述侵染包括侵染15分钟。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述侵染后，还包括：取出带柄子叶在灭菌的滤纸上晾干后，接种到含0.5mg/L萘乙酸、5mg/L 6-苄氨基嘌呤、4mg/L硝酸银、7g/L琼脂粉和30g/L蔗糖，pH5.8的MS培养基中，25℃暗培养3天，获得转基因外植体。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：将所述转基因外植体培养成转基因芽，然后再培养成转基因植株；

所述转基因芽的培养方法包括：将所述转基因外植体接种到筛选培养基中，25℃每天光照16h的条件下培养1～2个月即得；

所述转基因植株的培养方法包括：将所述转基因芽继代到MS中，待芽伸长至1cm以上，再接到筛选生根培养基中进行生根培养，然后挑选根系发达的植株移栽到灭菌的栽培基质中，浇透水并覆盖塑料膜，25℃每天光照16h的条件下培养至植株生长健壮后去掉塑料膜即得。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，

所述筛选培养基包括含200mg特美汀、25mg潮霉素、0.5mg/L萘乙酸、5mg/L 6-苄氨基嘌呤、4mg/L硝酸银、7g/L琼脂粉和30g/L蔗糖，PH5.8的MS培养基；

所述筛选生根培养基包括含有200mg特美汀、25mg潮霉素、0.5mg/L萘乙酸、7g/L琼脂粉和30g/L蔗糖的MS培养基；

所述基质包括草炭和蛭石，比例为蛭石：草炭＝1:3。

8.根据权利要求1-7任一所述的方法，其特征在于，所述含有待转基因的农杆菌侵染液的制备方法包括：

将含有待转基因的载体或质粒通过冻融法转到农杆菌中，获得农杆菌工程菌；将所述农杆菌工程菌的单菌落，接种到含卡那霉素50mg/L和庆大霉素50mg/L，PH7.0的LB液体培养基中，28℃、220r/min的条件下培养至菌液OD600值为0.5，然后取2ml的菌液离心，6000r/min的转速离心10min,弃上清后加入等体积的含100μM乙酰丁香酮和30g/L蔗糖的MS液体培养基混匀后，再以6000r/min的转速离心10min,弃上清后加入等体积的含100μM乙酰丁香酮和30g/L蔗糖的MS液体培养基混匀，再用20ml含100μM乙酰丁香酮和30g/L蔗糖的MS液体培养基稀释十倍，即得侵染液。

9.一种培养基，其特征在于，所述培养基包括下述1)-3)中至少一种：

1)含0.5mg/L萘乙酸、5mg/L 6-苄氨基嘌呤、4mg/L硝酸银、7g/L琼脂粉和30g/L蔗糖，PH5.8的MS培养基；

2)含200mg特美汀、25mg潮霉素、0.5mg/L萘乙酸、5mg/L 6-苄氨基嘌呤、4mg/L硝酸银、7g/L琼脂粉和30g/L蔗糖，PH5.8的MS培养基；

3)含有200mg特美汀、25mg潮霉素、0.5mg/L萘乙酸、7g/L琼脂粉和30g/L蔗糖的MS培养基。

10.权利要求1-8任一所述方法、权利要求9所述培养基的应用。