[发明专利]一种农杆菌介导的大白菜转基因方法

说明书

本发明公开了一种农杆菌介导的大白菜转基因的方法。所述方法通过用含有待转基因的农杆菌侵染液侵染大白菜籽苗的带柄子叶，成功的将目的基因转入大白菜的基因组中。经多次重复试验，本发明所提供的方法最高转化率为13.5％，平均转化效率8％，所得方法的基因转化的效率高。此外，本发明提供的方法中，多种培养基的组成成分和浓度配比基本一致，培养基无需反复更换、改变浓度，极大的简化了转基因操作过程，所得方法简便高效。本发明利用该方法建立了稳定的大白菜转基因体系，为大白菜分子育种及基因功能研究奠定基础。

技术领域

本发明属于植物基因工程领域，具体涉及一种农杆菌介导的大白菜转基因的方法。

背景技术

大白菜(Brassica rapa ssp.pekinensis)原产于中国，属于十字花科芸薹属(Brassica)中重要蔬菜作物之一，在我国生产消费中占据重要地位。近年来由于育种工作者的不断努力，大白菜育种已经取得很大成就，但随着人口数量的不断增长，提高大白菜产量，改良大白菜品质仍是当前重要任务。

随着部分模式植物基因组测序的完成，功能基因的研究愈发受到重视，通过分析和鉴定植物基因功能、发掘有益基因并应用于育种实践中，已成为发展趋势所在。因此建立一种简单高效的大白菜转基因方法，对大白菜分子育种及基因功能研究具有重要意义。

发明内容

本发明提供了一种简单高效的农杆菌介导的大白菜转基因的方法，所述方法用含有待转基因的农杆菌侵染液侵染大白菜籽苗的带有1-2mm子叶柄的带柄子叶，所得的基因转化的效率高；此外，所述方法中多种培养基的组成成分和浓度配比基本一致，培养基无需反复更换、改变浓度，极大的简化了转基因操作过程，所得方法简便高效。

本发明的一个目的是提供一种农杆菌介导的大白菜转基因方法，所述方法包括：用含有待转基因的农杆菌侵染液侵染大白菜籽苗的带柄子叶。

具体的，所述大白菜籽苗的带柄子叶的制备方法包括：将大白菜种子培养4天，获得籽苗，再将籽苗从子叶柄部切下，切去生长点，并带有1-2mm子叶柄。

具体的，所述种子在培养前，要进行消毒处理；再具体的，所述消毒处理包括将大白菜成熟的种子在超净工作台用体积浓度为75％的酒精浸泡30s，然后转入质量浓度为10％的NaClO溶液中消毒1min，再转入质量浓度为10％的NaClO溶液中消毒15min，灭菌水冲洗3～5遍。

具体的，所述籽苗为无菌籽苗。

具体的，所述培养使用的培养基包括含20g/L蔗糖和7g/L琼脂粉的1/2MS培养基。

具体的，所述侵染包括侵染15分钟。

具体的，所述侵染后，还包括：取出带柄子叶在灭菌的滤纸上晾干后，接种到含0.5mg/L萘乙酸、5mg/L 6-苄氨基嘌呤、4mg/L硝酸银、7g/L琼脂粉和30g/L蔗糖，pH5.8的MS培养基中，25℃暗培养3天，获得转基因外植体。

具体的，所述方法还包括：将所述转基因外植体培养成转基因芽，然后再培养成转基因植株；

所述转基因芽的培养方法包括：将所述转基因外植体接种到筛选培养基中，25℃每天光照16h的条件下培养1～2个月即得；

所述转基因植株的培养方法包括：将所述转基因芽继代到MS中，待芽伸长至1cm以上，具体为2厘米，再接到筛选生根培养基中进行生根培养，然后挑选根系发达的植株移栽到灭菌的栽培基质中，浇透水并覆盖塑料膜，25℃每天光照16h的条件下培养至植株生长健壮后去掉塑料膜即得。

具体的，所述筛选培养基包括含200mg特美汀、25mg潮霉素、0.5mg/L萘乙酸、5mg/L6-苄氨基嘌呤、4mg/L硝酸银、7g/L琼脂粉和30g/L蔗糖，PH5.8的MS培养基；