[发明专利]一种玉米淀粉降解能力提高的嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶突变体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种玉米淀粉降解能力提高的嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一种编码权利要求1所述的玉米淀粉降解能力提高的嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶突变体的基因。

3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

4.一种能表达生产权利要求1所述玉米淀粉降解能力提高的嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶突变体的载体。

5.一种能表达生产权利要求1所述玉米淀粉降解能力提高的嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶突变体的基因工程菌。

6.根据权利要求1所述的玉米淀粉降解能力提高的嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶突变体的制备方法，其特征在于，以氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示的生淀粉α-淀粉酶GTamy为出发序列，将GTamy中SBD结构域的氨基酸序列替换为突变体SBD-S498的氨基酸序列，其中SBD的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示，SBD-S498的氨基酸序列如SEQ ID NO：19所示。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

1)根据Geobacillus thermoleovorans的生淀粉α-淀粉酶GTamy的基因序列，其基因序列如SEQ ID NO：4所示，采用化学全合成的方法合成优化的基因后，将其克隆到重组质粒pSTOP1622中，构建重组质粒pSTOP1622-gtamyh；

2)合成核苷酸序列“5’-ATCGCGCGCAGGGAT-SEQ ID NO：20-CACCATCACCATCAC-3’”，采用无缝克隆方法将重组质粒pSTOP1622-gtamyh中编码SBD的核苷酸序列SEQ ID NO：6替换为SBD环化重排突变体SBD-S498的核苷酸序列SEQ ID NO：20，获得GTamy环化重排突变体的表达载体pSTOP1622-gtamyh/S498；

3)将重组质粒pSTOP1622-gtamyh/S498转化枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis WB600，获得枯草芽孢杆菌基因工程菌，诱导表达，获得生淀粉α-淀粉酶突变体GTamy-S498。

8.根据权利要求1所述玉米淀粉降解能力提高的嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶突变体在纺织、洗涤剂、制革、造纸、食品领域的应用。