[发明专利]HMGB1检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及一种HMGB1检测试剂盒及其制备方法，其中，HMGB1检测试剂盒包括：试剂1和试剂2；所述试剂1包括HMGB1抗体标记的胶乳微球、助悬剂、牛血清白蛋白、第一缓冲液；所述试剂2包括氯化钠、分散剂、表面活性剂、第二缓冲液。该HMGB1检测试剂盒是一种基于胶乳增强免疫比浊法检测HMGB1的试剂盒，使用时通过在均相反应体系中进行抗原、抗体反应，当抗原与抗体结合后，直接测定反应溶液的吸光度值来反应被测抗原的浓度，检测速度快、成本低、省时省力，且稳定性和重复性好，能较真实地反映被测物质的含量。

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，特别是涉及一种HMGB1检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

高迁移率族蛋白1(high mobility group protein，HMGB1)是存在于真核细胞核内的非组蛋白染色体结合蛋白，因其在聚丙烯酞胺凝胶电泳(PAGE)中迁移速度快而得名。HMGB1普遍存在于哺乳动物组织细胞中，是具有重要意义的炎症因子。HMGB1作为晚期炎症因子，相对于早期炎症因子在较长时间表达稳定，能够更好的反应体内炎症发生的情况，对临床治疗方案的确定具有更加重要的意义。

大量研究表明，在由细菌感染引起的炎症(例如内毒素血症和脓毒症，特别是急性炎症)中，早期炎症因子(例如TNF)刺激相关细胞(例如巨噬细胞)，开始分泌HMGB1，在一定时间后(例如18h)达到峰值。急性炎症经过治疗后，早期炎症因子回复到正常水平，若治疗效果不佳，晚期炎症因子(HMGB1)将会产生。随时监测晚期炎症因子，判断治疗效果，指导用药，及早采取措施，减少炎症对身体的伤害极为重要。

HMGB1检测运用非常广泛，但目前已有的方法由于操作时间长或灵敏度问题，不适于临床检验项目的开展。目前，市面上HMGB1检测主要采用ELISA法(酶联免疫吸附测定，enzyme linked immunosorbent assay)，其操作繁琐、耗时。而且，国产HMGB1ELISA检测试剂盒质量参差不齐，而进口试剂一般价格昂贵。因此，亟需一种成本低，检测速度快，适合临床样本检测项目的技术出现。

发明内容

基于此，有必要提供一种检测速度快、成本低的HMGB1检测试剂盒。

一种HMGB1检测试剂盒，包括：试剂1和试剂2；

所述试剂1包括HMGB1抗体标记的胶乳微球、助悬剂、牛血清白蛋白和第一缓冲液；

所述试剂2包括氯化钠、分散剂、表面活性剂和第二缓冲液。

采用上述HMGB1检测试剂盒进行检测时，取试剂1和试剂2混合，然后加入待测样品，通过在均相反应体系中进行抗原、抗体反应，并测定反应溶液的吸光度值来反应被测HMGB1的浓度。其通过在胶乳微球表面交联HMGB1抗体，当抗原与交联有HMGB1抗体的胶乳微球结合后，能够在短时间内迅速聚集在一起，从而改变反应溶液的吸光度，通过直接测定反应溶液的吸光度值来反应被测抗原的浓度，相较于ELISA法，省却了ELISA法反复孵育和洗板等繁琐操作步骤，几分钟就能获得结果，省时省力；并且，操作步骤的简化也相应地避免了繁琐的人为操作因素和试剂、环境等外界因素的干扰，稳定性和重复性都较好，能较真实地反映被测物质的含量。

而且，通过将HMGB1抗体标记在胶乳颗粒上，在保证抗体与抗原特异性结合的条件下，还提高试剂检测的敏感性。

在其中一个实施例中，所述试剂1包括以下终浓度的组分：60μg/mL～120μg/mLHMGB1抗体、0.1v/v％～0.15v/v％胶乳微球、30g/L～60g/L助悬剂、5g/L～20g/L牛血清白蛋白和40mM/mL～60mM/mL第一缓冲液，所述试剂1的pH值为7～8。

在其中一个实施例中，所述胶乳微球为表面活化的聚苯乙烯胶乳微球，所述聚苯乙烯胶乳微球的表面活化基团为羧基，所述胶乳微球的颗粒直径为20nm～50nm。