[发明专利]一种用于鉴别桑树桑黄的引物对、试剂盒和方法有效
申请号: | 201810724947.5 | 申请日: | 2018-07-04 |
公开(公告)号: | CN108588267B | 公开(公告)日: | 2022-03-15 |
发明(设计)人: | 王伟科;宋吉玲;袁卫东;陆娜;闫静 | 申请(专利权)人: | 杭州市农业科学研究院 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
代理公司: | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人: | 沈金龙 |
地址: | 310024 浙江省*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 鉴别 桑树 引物 试剂盒 方法 | ||
1.一种鉴别桑树桑黄的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)提取待检测样本的基因组DNA,所述待检测样本为桑树桑黄、杨树桑黄或丁香桑黄;
(2)以所述基因组DNA为模板,利用引物对进行PCR扩增,
所述引物对包括上游引物和下游引物,核苷酸序列为:
上游引物5’-GCTGGTGCGAAATCGCGCATG-3’,
下游引物5’-CAAGAAGGAGGTGACTCCTTG-3’;
(3)PCR扩增产物进行电泳检测,
若检测结果出现650bp的条带,则待检测样本为桑树桑黄;
若检测结果没有条带,则待检测样本为杨树桑黄或丁香桑黄,
步骤(2)中PCR扩增体系为:
补水至总体积20μl,
步骤(2)中PCR扩增条件为:
94℃预变性7min;94℃变性20s,57℃退火30s,72℃延伸30s,共30个循环;最后72℃延伸补平7min,
所述的方法,还包括验证步骤,所述验证步骤为:以所述基因组DNA为模板,利用验证引物对进行PCR扩增,PCR扩增产物进行电泳检测,若检测结果出现580bp的条带,则待检测样本为杨树桑黄或丁香桑黄,若检测结果没有条带,则待检测样本为桑树桑黄,
其中,所述验证引物对包括上游引物和下游引物,核苷酸序列为
上游引物5’-GTTAGTAGTCTGAGGTCTGTC-3’,
下游引物5’-GGTGTCAAGAAAAAGGAGGTAAC-3’。
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