[发明专利]一种用于鉴别桑树桑黄的引物对、试剂盒和方法

说明书

本发明公开了一种用于鉴别桑树桑黄的引物对、试剂盒和方法。所述引物对，包括上游引物和下游引物，核苷酸序列为：上游引物5’‑GCTGGTGCGAAATCGCGCATG‑3’，下游引物5’‑CAAGAAGGAGGTGACTCCTTG‑3’。本发明通过对多个桑黄样品的ITS序列进行分析比较，发现ITS序列存在一定区别，通过对这三种桑黄的ITS序列进行比较分析，设计出了上述用于鉴别桑树桑黄的引物对，称为鉴定引物对，用该鉴定引物对PCR扩增桑黄样本的基因组DNA，扩增结果经电泳检测，如果扩增出650bp的条带，则待检测样本为桑树桑黄。

技术领域

本发明涉及生物技术检测技术领域，特别是涉及一种用于鉴别桑树桑黄的引物对、试剂盒和方法。

背景技术

桑黄是一种名贵的药用真菌，目前许多研究者对“桑黄”的基原物种颇有争议，对其种名尚无明确的定论，《中国药用真菌》中指出，真正桑黄指生于桑树干上的一种。其在野外的数量很少，且只长在桑树树干，因此称之为桑黄(Sanghuangporus sanghuang)。

但是，国内桑黄无论是科学研究还是消费市场相对混杂，与野生桑树桑黄类外观类似的种类颇多，尤其以杨树桑黄及丁香桑黄最普遍，其在野外的数量约为桑树桑黄的百倍，且该类别桑黄比野生桑树桑黄更容易人工培育。由于该类别桑黄也具有一定的药效性，因此，其往往充斥着市场当做桑树桑黄来使用。

由于缺乏分子层面的鉴定技术，仅从外观形态很难把杨树桑黄、丁香桑黄与野生桑树桑黄加以区别，因此，基础研究材料及市售产品普遍真假桑黄混杂不清，这不仅造成了桑黄的命名不清，普遍存在“同种异名”、“同名异种”的现象，也造成了桑黄在科学研究中的本质特性及药用功效难以精确明白，严重阻碍了桑黄新品种的选育及产业的发展。

自本世纪以来，一些基于PCR的分子标记技术如RAPD(Random AmplifiedPolymorphic DNA，随机扩增多态性DNA)、ISSR(Inter-Simple Sequence Repea，简单序列重复区间扩增多态性)和SRAP(sequence-related amplified polymorphism，相关序列扩增多态性)相继用于桑黄的种质资源遗传多样性、遗传距离研究，但对于分子标记与桑黄性状的连锁、桑黄品种间的分子鉴别研究很少。几乎没有专门用于鉴定桑树桑黄的特异分子标记。且某些分子标记技术所采用的均为通用引物，其PCR扩增图谱不仅复杂、重复性差，而且特异性不高，因此并不适合用于专门针对桑树桑黄的品种鉴别，只有开发出某个品种稳定、特异的DNA指纹标记才能真正用于桑树桑黄品种的准确快速鉴定。

公开号为CN106811507A的中国发明专利公开了一种桑黄的快速鉴定方法，其通过PCR的方法对待测样本基因组的ITS区域进行扩增，当获得DNA长度大致为750bp大小时，对片段进行测序后，符合该专利给出的序列，判断待检测样本为桑黄。但该专利只能用来区别桑黄(Inonotus sanghuang)品种及桑黄(Inonotus baumii)品种，并不能用来很好的对桑树桑黄(Sanghuangporus sanghuang)进行鉴定，存在很大的使用局限性。且PCR后的片段要经过序列测定比较，步骤复杂，费用大，大大限制了其在鉴定中的使用，因此，简单、快速、有效的桑树桑黄鉴定方法刻不容缓。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的不足，提供了一种用于鉴别桑树桑黄的引物对、试剂盒和方法。

一种用于鉴别桑树桑黄的引物对，包括上游引物和下游引物，核苷酸序列为：

上游引物5’-GCTGGTGCGAAATCGCGCATG-3’，

下游引物5’-CAAGAAGGAGGTGACTCCTTG-3’。