[发明专利]一种金鱼Tgf2转座酶及其制备与保存方法在审
| 申请号： | 201810727755.X | 申请日： | 2018-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN108949787A | 公开（公告）日： | 2018-12-07 |
| 发明（设计）人： | 邹曙明;赵茜;郑国栋;徐海丽;郑寿长 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/54 | 分类号： | C12N15/54;C12N15/70;C12N9/96;C12N9/12 |
| 代理公司： | 北京东方盛凡知识产权代理事务所(普通合伙) 11562 | 代理人： | 宋平 |
| 地址： | 201306 上海市浦东新区*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 金鱼 制备 大肠杆菌 密码子优化 稀有密码子 蛋白生产 发酵条件 同义替换 重组表达 简并性 酶活性 密码子 偏爱性 转基因 鱼类 保存 | ||
1.一种金鱼Tgf2转座酶，其特征在于所述金鱼Tgf2转座酶的核酸编码序列如SEQ IDNO.6所示。
2.一种金鱼Tgf2转座酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)金鱼Tgf2转座酶密码子的优化，根据表达宿主对密码子的偏爱性和简并性把金鱼Tgf2转座酶中稀有密码子进行同义替换；
(2)重组蛋白的表达；
(3)重组蛋白的纯化。
3.如权利要求2所述的金鱼Tgf2转座酶的制备方法，其特征在于，所述宿主是大肠杆菌。
4.如权利要求3所述的金鱼Tgf2转座酶的制备方法，其特征在于，根据大肠杆菌对密码子的偏爱性和简并性把金鱼Tgf2转座酶中30-100个，优选50-90个，更优选83个稀有密码子进行同义替换。
5.如权利要求2所述的金鱼Tgf2转座酶的制备方法，其特征在于，所述金鱼Tgf2转座酶的编码序列参照GeneBank登录号：JN886586。
6.如权利要求2所述的金鱼Tgf2转座酶的制备方法，其特征在于，所述优化后的金鱼Tgf2转座酶的核酸编码序列如SEQ ID NO.6所示。
7.如权利要求3所述的金鱼Tgf2转座酶的制备方法，其特征在于，在菌体生长至OD600＝0.5-0.6时加入1mM的IPTG在30℃下诱导6h。
8.如权利要求3所述的金鱼Tgf2转座酶的制备方法，其特征在于，通过亲和柱中的Ni2+对重组蛋白中的His标签进行特异性结合纯化所述金鱼Tgf2转座酶。
9.一种金鱼Tgf2转座酶的保存方法，其特征在于，所述金鱼Tgf2转座酶是如权利要求1所述的金鱼Tgf2转座酶或如权利要求2-8中任一项所述的方法制备的金鱼Tgf2转座酶，对所述金鱼Tgf2转座酶冷冻干燥。
10.如权利要求9所述的金鱼Tgf2转座酶的保存方法，其特征在于，在所述冷冻干燥过程中加入保护剂，所述保护剂选自蔗糖、甘露醇、乙醇。
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