[发明专利]基于限制交替三线性分解算法和HPLC-DAD仪器快速测定手性物质的方法

说明书

本发明公开一种基于限制交替三线性分解算法和HPLC‑DAD仪器测定手性物质的方法：首先分别准备校正集样本、验证集样本和预测集样本，利用HPLC‑DAD仪器对样本进行检测，然后建立校正模型并做回归分析，即先将校正集样本、验证集样本和预测集样本的HPLC‑DAD数据组成三维数据阵X，再利用向量子空间投影结合蒙特卡罗模拟方法确定体系因子数，并利用限制交替三线性分解算法对三维数据阵分解，建立校正模型，并对验证样和预测样品中手性物质的浓度进行回归分析，最后测得体系中手性物质的浓度；本发明可以有效的解决手性物共流出峰的问题，避免浪费大量时间来筛选手性柱柱型和流动相，具有快速、绿色、环保的特点。

背景技术

手性是自然界物质的本质属性，手性农药对映体间活性毒性差异显著，而这种 差异与所处环境密切相关。中国当前使用的农药中约有40％是手性物质，且随着 复杂结构不断引入，该比例呈逐渐增加的趋势。因此，建立手性农药快速检测方 法，不仅可有效降低农药的生产成本，还可以减少农药向自然生态系统中的投入 量，进而减轻或避免农药对生态环境和动植物的危害。

目前常见的手性物质分析方法，包括化学拆分法、酶或微生物法和色谱拆分法，其中，色谱拆分法具有许多明显的优越性，可以满足各种条件下对映体分离和测 定的要求，能够进行简便快速的定性定量分析，也能进行制备规模的分离和微量 测定。色谱拆分法可以分为手性衍生化法、手性流动相法和手性固定相法。其中， 基于手性固定相法的色谱拆分法最为常见。手性固定相法是基于样品与固定相表 面的手性选择剂形成暂时的非对映体配合物的能量差异或稳定性不同而达到手 性分离，可不经过转变成非对映体的直接拆分。该方法的流动相组成简单，重现 性好，操作方便，应用范围极其广泛。但手性固定相法具有很强的专一性，一种 类型的固定相只能拆分一类或某几类对映体，目前已经开发了很多具有不同功能 的手性柱。因此，利用高效液相色谱-二极管阵列紫外检测器仪器(HPLC-DAD) 方法检测手性农药，既需要花费大量时间来筛选合适的柱型和流动相，使得手性 物在手性柱上有分离效果；而且即使手性物在某一手性柱上有分离效果，还需要 长时间探索合适仪器方法使得手性物质在手性柱上完全分离，并且在色谱流出时 间中不能与未知干扰重叠，才可以准确定量。因此，基于HPLC-DAD仪器开发通 用、快速的手性化合检测方法已成为本领域亟待解决的技术难题。

发明内容

针对上述问题，本发明基于“数学分离”增强“色谱分离”思路，针对手性物 分析的特殊体系，开发了限制交替三线性分解算法(RATLD)，并结合基于手性柱 的HPLC-DAD仪器对复杂样品中的手性物质进行快速定量分析。本发明技术方法 是通过如下方法实现的：

1)校正集样本的准备：购买待测手性物物质标品，并合适的有机溶剂(如己 烷)分别配制手性物的工作液，在浓度线性范围内配制不同梯度浓度的手性物质 混合溶液，作为校正集样本，其中浓度配比可以根据本领域常规正交试验设计和 均匀实验设计等方法进行设定(如参照《分析化学手册(第二版)第十分册-化 学计量学》，化学工业出版社)；

以测定水稻样品中的R-呋虫胺和S-呋虫胺为例，利用正己烷分别溶解R-呋虫 胺和S-呋虫胺标品，均配制成的浓度为10.0mg/L的工作液，然后利用工作液 配制6组不同浓度梯度的手性物混合溶液作为校正样，并用正己烷定容至1mL， 定容后6个校正集样本中，R-呋虫胺浓度依次为4.0、2.0、1.0、0.5、0.2、0.0mg/L， S-呋虫胺浓度依次为0.0、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0mg/L。

2)验证集样本的准备：称取不含手性物质的待测样品，加入一定量的待测手 性物标准品溶液，依据本领域常规样品处理方法(如文献《液相色谱分析技术标 准汇编》，中国标准出版社)对待测样品进行提取，确保待测样品提取液符合色 谱仪器进样标准。其中，验证样品提取液的浓度应该在校正集样本中手性物的浓 度范围内。