[发明专利]一种定量检测血液中CA153的时间分辨荧光免疫层析试纸条及制备方法

权利要求书

1.一种定量检测血液中CA153的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，包括底板（7）和底板（7）上依次紧密连接的样品垫（1）、荧光微球结合物垫（2）、反应膜（3）和吸水垫（6），

其中所述底板为PVC底板；所述荧光微球结合物垫上包被有CA153抗体和鼠抗兔IgG抗体；所述反应膜为硝酸维生素（NC）膜，所述NC膜上设有检测线（4）和质控线（5）；所述检测线（4）上包被有CA153抗体，所述质控线（5）上包被有兔IgG。

2.根据权利要求1所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述样品垫（1）、荧光微球结合物垫（2）、反应膜（3）和吸水垫（6）在底板（7）按顺序排列，其中，所述样本垫（1）与所述荧光微球结合物垫（2）部分重合，重合部分长度占所述荧光微球结合物垫（2）长度的1/5～1/3；

所述荧光微球结合物垫（2）与反应膜（3）有部分重合，重合部分长度占所述荧光微球结合物垫（2）长度的1/5～1/3；

所述反应膜（3）与吸水垫（6）有部分重合，重合部分长度占所述荧光微球结合物垫（2）长度的1/10～1/5；

所述检测线（4）和质控线（5）的长度占所述反应膜（3）长度的1/15～1/10；

所述检测线（4）和样本垫（1）的距离占所述反应膜（3）长度的1/4～1/3；

所述检测线（4）和质控线（5）之间的间距占所述反应膜的1/3～1/2。

3.根据权利要求1所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述CA153抗体的终浓度为0.05～0.5mg/mL，优选为0.1～0.3mg/mL；所述鼠抗兔IgG抗体的终浓度0.05～0.5mg/mL，优选为0.1～0.3mg/mL。

4.根据权利要求1所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光微球的直径为50～500nm，优选地为100～300nm，更优选为200nm。

5.根据权利要求1-4任一所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光微球载有镧系元素或其螯合物，所述镧系元素优选为钐、铕或铽。

6.权利要求1-5任一所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、结合物垫的处理：用定量喷液装置将结合物垫处理液以16μL/cm的量喷涂于结合物垫上后45℃烘干24小时；

B、NC膜的制备：使用包被缓冲液分别将抗CA153包被抗体以及兔IgG稀释到0.8mg/mL和1.0mg/mL浓度，使用定量喷液装置分别将两者以0.5-0.8cm的间隔喷印于硝酸纤维素膜上，后于45℃烘干72小时，加入干燥剂封存备用；

C、结合物垫的制备：选用直径为200nm的乳胶微球，使用碳二亚胺（EDC）共价偶联的方式将CA153抗体和鼠抗兔IgG标记到乳胶微球上；将制备好的乳胶微球使用定量喷液装置以8μL/cm的量喷涂于处理过的结合物垫上；

D、试纸条的组装：在白色PVC底板上依次相互交错2mm地贴上NC膜、结合物垫、样品垫、吸水垫，即得到时间分辨荧光免疫层析试纸条。

7.根据权利要求6所述的时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述步骤C中将CA153抗体和鼠抗兔IgG标记到乳胶微球上的步骤为：使用含有0.05mol/L的 MES缓冲液洗涤乳胶微球，加入EDC和NHS使终浓度为分别为0.5mg/mL和5mg/mL，超声混匀置摇床避光孵育15min，离心20min去上清，用MES洗涤两次后加入抗体，使得抗体终浓度为0.2mg/mL，置于摇床避光孵育3h，加入30％封闭液，置于摇床避光孵育1.5h，封闭完成后去上清，用MES洗涤两次，0.05% Tween-20，0.1%酪蛋白和0.5％BSA的50mmolTris-Hcl pH8.2的保存缓冲液，复溶乳胶微球，4℃保存备用；使用同样的方法将鼠抗兔IgG标记到乳胶微球上，后用结合物稀释液以1:10-1:15的比例将标记好的CA153和鼠抗兔IgG抗体稀释。