[发明专利]一种定量检测血液中CA153的时间分辨荧光免疫层析试纸条及制备方法

说明书

本发明涉及一种定量检测血液中CA153的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法。该试纸条是在白色PVC底板上依次相互交错2mm粘贴上NC膜、标记了CA153抗体和鼠抗兔IgG的荧光微球结合物垫、样品垫、吸水垫，然后再用配套的上下两个塑料卡壳固定试纸条组装而成的测试卡，NC膜上预包有CA153抗体检测线和兔IgG质控线，本发明将时间分辨荧光免疫层析技术引入到了血液中CA153的定量检测中，不仅大大的节约了检测时间，提升了检测的稳定性和灵敏度，而且操作简便，可用于现场筛查；同时也具有成本便宜，性价比高的优点。

技术领域

本发明属于医学检验领域，特别是涉及一种定量检测血液中CA153的时间分辨荧光免疫层析试纸条及制备方法。

背景技术

CA15-3是乳腺癌的最重要的特异性标志物。30%-50%的乳腺癌患者的CA15-3明显升高，其含量的变化与治疗效果密切相关，是乳腺癌患者诊断和监测术后复发、观察疗效的最佳指标。CA15-3动态测定有助于II期和III期乳腺癌病人治疗后复发的早期发现：当CA15-3大于100U/mL时，可认为有转移性病变。患者血清CA15-3水平的消长与乳腺癌病情变化相平行，是复发和转移的重要信号，而且这种信号的发出要比临床症状的出现和用诸如B超、X线或CT等检出复发和转移的时间要早。有报道指出，CA15-3水平超过30U/mL、40U/mL和50U/mL时，判断乳腺癌患者存在术后局部区域复发或远处转移，其敏感性均超过90%，特异性分别为95%、99%和100%，正确判断率分别达到56%、83%和100%。此外，CA15-3水平增高的乳腺癌患者发生转移的时间较CA15-3正常的患者要早许多。据分析研究，乳腺癌患者血清CA15-3水平变化与其局部淋巴结及远处转移情况之间存在改变的一致性，尤其是有远处转移灶者，其CA15-3表达水平及阳性率均显著增加，所以，CA15-3具有对乳腺癌转移起监视的作用，如其血清水平持续升高，则应开始或加强化疗、放疗或改用内分泌治疗等。

目前的血液中CA153的诊断技术主要包括：酶联免疫实验（ELISA）、化学发光（CLIA）、胶体金免疫层析等方法，但这些方法都有各自的特点及不足：ELISA和化学发光以及时间分辨荧光法原理类似，只在灵敏度方面有差异，目前大都实现了自动化、大批量、定量检测，但是存在方法间结果差异大，线性范围较窄等缺点，另外，自动化检测目前由国外大厂商所垄断，仪器设备昂贵，并且不适合单人份和较小批量检测用，大大限制了它们在基层医院、诊所的应用，近年来出现了胶体金免疫层析法来检测总CA153，快速，便捷，单人份操作，但是缺点是只能实现半定量，只能指示一个大概范围，无法实现精确定量，而且因为胶体金灵敏度的限制，无法检测低浓度CA153，异常标本需要使用其他方法复核检测，无形中增加了被测试者的就医成本，在市场推广方面有较大难度，很难大面积使用。

时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）是在传统荧光分析的基础上创立的一种新型非放射性免疫分析技术。TRFIA以含有镧系稀土元素的纳米微球作为标记物的，根据镧系金属螯合物荧光持续时间长且Stokes位移大，用时间分辨技术测量荧光，有效排除非特异性荧光的干扰，具有灵敏度高、特异性强和稳定性好等特点。与经典的时间分辨荧光免疫分析方法DELFIA法不同，时间分辨荧光免疫层析技术采用荧光纳米微球作为标记物，每个微球中可包裹成千上万个荧光分子，大大提高了标记效率，有效的提高了灵敏度；同时纳米荧光微球表面修饰有合适密度的羧基，用于与蛋白或抗体的共价偶联，提高标记物的稳定性。随着科技的发展，即时诊断领域中的免疫层析技术，从第一代胶体金、彩色乳胶到第二代荧光微球技术，实现了从定性到定量分析的飞跃。而时间分辨荧光免疫层析技术则更进一步，提升了检测的稳定性和灵敏度，而且操作简便，检测时间短，可用于现场筛查；同时也具有成本便宜，性价比高的优点。