[发明专利]一种红根野蚕豆组培快繁新方法

说明书

本发明公开了一种红根野蚕豆组培快繁新方法，包括外植体的选择、外植体的清洁与消毒、丛生芽诱导、丛生芽增殖及生根等步骤。本发明对红根野蚕豆的组培快繁技术展开了探索，确立了无菌材料的获得、丛生芽的诱导、丛生芽的增殖、丛生芽的生根等理想培养条件，最终成功建立了红根野蚕豆的组培快繁体系，为实现对红根野蚕豆野生资源的保护、栽培、对种苗的需求以及基因库的建立奠定了技术基础，解决野生红根野蚕豆野生资源过度开发、药材供应少和种植不成规模等问题。

技术领域

本发明涉及一种中药材的组培快繁方法，属于植物组织培养及中药材种植领域，特别涉及红根野蚕豆的组培快繁方法。

背景技术

红根野蚕豆(Centranthera grandiflora Benth)为玄参科胡麻草属草本植物，以全草入药，有散瘀止血；消肿止痛的功效，主要用于咯血；咳血；吐血；妇女闭经；内伤瘀血；中老年人风湿痹痛；筋骨痛；脑血栓；脑溢血；酒精肝；肠胃炎；咽喉炎；口腔溃疡；跌打损伤；妇科炎症；胃癌；肝癌等。主要分布于云南、贵州、广西等地，生于海拔800～1400m的石山灌丛草坡、路旁岩石处。目前本植物作为药材的来源基本为野生资源，少有人工种植。至2014年其红根野蚕豆就因市场药材供不应求价格迅猛增长，而野生资源以种子进行繁殖，其发芽周期长，发芽率极低，导致野生资源被过度采伐。虽然近年来不断有企事业单位进行人工种植，但限于种苗以及种植技术瓶颈，仍不能满足市场需求，本发明利用现代生物技术，对红根野蚕豆进行无性繁殖，可充分体现母本性状的优质性状，一方面可为种植市场提供充足的优质种苗，另一方面在一定程度保护野生资源被过度采挖，降低濒危风险。

发明内容

本发明针对以上所述现有技术的不足，发明了一种组分简单、操作简便、生产周期短、可为规模化种植短期内快速提供红根野蚕豆优质种苗的组培技术繁育方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

1.外植体的选择：将健壮植株，栽植于实验室内，每隔3天用75％多菌灵500倍液，于早上十点左右喷施5次以上，选取健壮无病虫害茎端10-20cm作为外植体；

2.外植体的清洁：将选取的外植体剪成约2-3cm大小的带芽(腋芽或顶芽)茎段，用饱和肥皂水溶液涮洗10-15min，后用自来水冲洗3-4次至无肥皂液残留，加适量水，再加2-3滴吐温-80，振摇10-15min，用自来水冲淋50-60min。

3.外植体的消毒：将清洗好的外植体倒出全部流动水，转移至超净工作台内，加入75％酒精振摇10-25s，无菌水涮洗2-3次，再加入饱和漂白粉溶液振摇15-20min，无菌水涮洗2-3次，最后加入0.1％升汞溶液+1滴吐温-80振摇7-8min，无菌水涮洗5-6次，用无菌纸吸去外植体表面水分。

4.丛生芽诱导培养：将消毒好的外植体剪去两端伤口至0.5-1.0cm大小带芽茎段，斜插于1/2WPM或1/4MS+NAA 0-0.1mg/L+6-BA 0.5-2.0mg/L+ZT0.01-0.1mg/L+活性炭0.5-1.0g/L的诱导培养基中，培养环境为温度25±2℃，光照强度1000-2000lux，单日光照时间为培养前15天为6h，15天后为12h的条件下培养，50天后丛生芽诱导率为70％-80％。

5.增殖培养：红根野蚕豆经诱导产生丛生芽后，将其丛生芽按节间剪成带芽小段，斜插于1/2WPM或1/4MS+6-BA 1.0-2.0mg/L+KT 2.0-4.0mg/L+硝酸银1.0μg/L+马铃薯30-50g/L+香蕉30-50g/L+活性炭0.5-1.0g/L的增殖培养基中，培养环境为温度25±2℃，光照强度3000-4000lux，单日光照时间为12h的条件下培养40天，丛生芽增殖倍数可达25-30倍。