[发明专利]血清内源性小分子在评价喉癌肿瘤细胞分化程度中的应用

说明书

本发明属于血清内源性小分子应用技术领域，具体涉及血清内源性小分子在评价喉癌肿瘤细胞分化程度中的应用。本发明血清内源性小分子在评价喉癌肿瘤细胞分化程度中的应用，所述的血清内源性小分子指的是八个喉癌生物代谢标志物，它们是在喉鳞癌血清样本的基础上经过LC‑MS代谢组学分析筛选出来的，具体包括代谢物L‑Carnitine、代谢物9‑Decenoylcarnitine、代谢物Glycocholic acid、代谢物Oleoyl glycine、代谢物cis‑5‑Tetradecenoylcarnitine、代谢物3,5‑Tetradecadiencarnitine、代谢物2‑Hydroxyadipic acid和代谢物Sphingosine 1‑phosphate，依据八种血清内源性小分子含量变化对喉癌细胞的分化程度进行评价。本发明血清代谢组学的喉癌分化程度评价方法采用血清样本，成本低、对机体损伤性小。

技术领域

本发明属于血清内源性小分子应用技术领域，具体涉及血清内源性小分子在评价喉癌肿瘤细胞分化程度中的应用。

背景技术

喉癌是喉部最常见的恶性肿瘤，以鳞状细胞癌多见，且在中国北方地区高发。临床上，喉癌其恶性程度的不同，对机体的影响也不同，可通过分化程度预测肿瘤的恶性程度。组织分化程度高、细胞和组织结构异型性小；分化程度低，细胞异型性越明显，生长迅速，浸润破坏器官的结构和功能，并可发生转移。一般，鳞癌分Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级，分别代表高分化、中等分化和低分化，代表喉癌的恶性程度，Ⅰ级(高分化)鳞癌恶性程度低，Ⅲ级(低分化)鳞癌恶性程度高，Ⅱ级(中分化)界于两者之间。

机体内源性小分子物质组是生命活动的基础，机体的功能状态必然反映在体内代谢组上。代谢组学(metabonomic或metabolomics)是以组群指标分析为基础，以高通量检测和数据处理为手段，以信息建模与系统整合为目标的系统生物学的一个分支，对生物代谢层面进行研究提供了了解生物体的独特视角。代谢组学在肿瘤生物学研究中主要优势之一就在于，接受刺激后的几秒或者更短时间内代谢物水平会有所改变，这种反应速度与肿瘤应对环境改变的速度更为一致；因此，利用恰当的代谢组学分析平台捕捉到这些代谢组的改变，进而能够系统而全面地研究机体在各种应激下代谢物在不同时间点的变化规律。迄今为止，还没有利用代谢组学平台结合统计学方法构建模型并利用代谢组的改变来客观准确评价喉癌分化程度的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供有效的血清代谢组学方法包括指纹图谱和差异代谢物积分面积归一化数值，以此定量数值作为肿瘤分化程度的指标，解决肿瘤分化程度缺乏准确定量评价方法的问题。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

血清内源性小分子在评价喉癌肿瘤细胞分化程度中的应用，所述的血清内源性小分子指的是八个喉癌生物代谢标志物，它们是在喉鳞癌血清样本的基础上经过LC-MS代谢组学分析筛选出来的，具体包括代谢物L-Carnitine、代谢物9-Decenoylcarnitine、代谢物Glycocholic acid、代谢物Oleoyl glycine、代谢物cis-5-Tetradecenoylcarnitine、代谢物3,5-Tetradecadiencarnitine、代谢物2-Hydroxyadipic acid和代谢物Sphingosine1-phosphate，依据八种血清内源性小分子含量变化对喉癌细胞的分化程度进行评价。

本发明喉癌生物代谢标志物的筛选方法包括以下步骤：

(1)样本处理和分析：将血清样本于冰水混合物中解冻后，取100μL并加入400μL乙腈，充分震荡均匀后，4℃下13000rpm离心20min，取上清吹干，再加入100μL乙腈-水溶液后，涡旋2min，4℃下13000rpm离心20min，取上清液进行LC-MS分析，其中乙腈-水溶液中乙腈和水的体积比为4:1；