[发明专利]一种高效表达磷脂酶D的枯草芽孢杆菌工程菌

权利要求书

1.一种高效表达磷脂酶D的枯草芽孢杆菌工程菌，其特征在于，所述工程菌包含重组质粒与枯草芽孢杆菌表达宿主；所述重组质粒包含融合基因以及表达载体；所述融合基因为磷脂酶D基因（PLD）与枯草芽孢杆菌ɑ-淀粉酶信号肽基因（amyE）融合后的PLD-amyE；所述表达载体为pMA0911，所述枯草芽孢杆菌ɑ-淀粉酶信号肽基因来源于枯草芽孢杆菌WB168；所述磷脂酶D基因来源于链霉菌。

2.如权利要求1所述的一种高效表达磷脂酶D的枯草芽孢杆菌工程菌，其特征在于，所述重组质粒为RBS及spacer区进行过优化的重组质粒；所述优化是指将重组质粒的RBS及spacer区替换为翻译速率提升的RBS及spacer区；所述翻译速率是指RBS及spacer区的mRNA翻译成蛋白质的速率。

3.如权利要求2所述的一种高效表达磷脂酶D的枯草芽孢杆菌工程菌，其特征在于，所述优化为将重组质粒pMA0911-PLD-amyE的RBS及spacer区替换为较原始RBS及spacer区翻译速率提高3倍的RBS及spacer区。

4.一种高效表达磷脂酶D的方法，其特征在于，所述方法为使用权利要求1-3任一所述的枯草芽孢杆菌工程菌为生产菌株。

5.如权利要求4所述的一种高效表达磷脂酶D的方法，其特征在于，所述方法为先将重组枯草芽孢杆菌接种于种子培养基中，于35~37℃、180~200rpm下培养至对数生长期，作为种子液，再将种子液接入到发酵培养基中，于35~37℃、180~200rpm条件下培养36h。

6.如权利要求5所述的一种高效表达磷脂酶D的方法，其特征在于，所述发酵培养基含有甘油15g/L，胰蛋白胨12g/L，酵母粉24g/L，磷酸二氢钾2.31g/L，三水磷酸氢二钾16.42g/L。