[发明专利]一种与耐ATRA急性髓系白血病细胞特异性结合的多肽及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201810734934.6 | 申请日： | 2018-07-06 |
| 公开（公告）号： | CN109021077A | 公开（公告）日： | 2018-12-18 |
| 发明（设计）人： | 缪凤琴;张建琼;张莹;张亚芬;叶梦滢 | 申请（专利权）人： | 东南大学 |
| 主分类号： | C07K7/08 | 分类号： | C07K7/08;C12N5/09;A61K38/10;A61P35/02 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 孙斌 |
| 地址： | 211102 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 多肽 特异性结合 耐药性 急性髓系白血病细胞 制备方法和应用 筛选 氨基酸序列 小分子多肽 肿瘤靶向性 靶向治疗 碱基序列 穿透力 活性高 亲和力 合成 填补 研究 | ||
1.一种与能够与ATRA耐药性AML细胞特异性结合的多肽，命名为pepNo.5R5，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种与能够与ATRA耐药性AML细胞特异性结合的多肽，命名为pepNo.5R5，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.一种产生权利要求1所述的与能够与ATRA耐药性AML细胞特异性结合的多肽的细胞株，其特征在于，所述细胞株的保藏编号为CCTCC NO.C2018139，命名为HL-60R。
4.一种权利要求1所述的与ATRA耐药性AML细胞特异性结合的多肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)以ATRA对HL-60进行体外诱导筛选，成功获得了具有稳定耐药性状的细胞株HL-60R；
(2)以构建的HL-60R细胞作为正筛细胞、亲代HL-60细胞作为负筛细胞，进行了全细胞消减筛选和多轮全细胞消减筛选，筛选出与HL-60R细胞特异性结合的噬菌体克隆；
(3)挑选噬菌体克隆进行测序，选择展示有高频率一致性外源插入序列的噬菌体克隆，鉴定挑选出的噬菌体克隆与ATRA耐药性AML细胞的结合水平，其中一种噬菌体克隆的氨基酸序列为权利要求1所述的多肽pepNo.5R5；
(4)将上述pepNo.5R5多肽通过人工方式合成。
5.根据权利要求所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述ATRA对HL-60进行体外诱导筛优选为采用浓度递增间歇诱导法。
6.根据权利要求所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述进行了全细胞消减筛选和多轮全细胞消减筛优选为采用基于微流控的噬菌体筛选方法。
7.根据权利要求所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述鉴定挑选出的噬菌体克隆与ATRA耐药性AML细胞的结合水平为通过滴度测定法、免疫荧光法和流式细胞术。
8.一种权利要求1所述的与ATRA耐药性AML细胞特异性结合的多肽在靶向多药耐药AML的药物制备中的应用。
9.一种权利要求1所述的与ATRA耐药性AML细胞特异性结合的多肽在多药耐药AML诊断试剂盒制备中的应用。
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