[发明专利]一种与耐ATRA急性髓系白血病细胞特异性结合的多肽及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种与耐ATRA急性髓系白血病细胞特异性结合的多肽及其制备方法和应用。一种与能够与ATRA耐药性AML细胞特异性结合的多肽，命名为pepNo.5R5，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明筛选得到了一种与ATRA耐药性AML细胞特异性结合的多肽，填补了目前缺乏与ATRA耐药性AML细胞结合的多肽的空白。本发明筛选得到多肽为可通过人工方法合成的小分子多肽，分子量小、活性高、穿透力强、亲和力高、特异性高、毒性低，适合作为靶向治疗的载体；本发明筛选得到的多肽具有良好的肿瘤靶向性，为该多肽的临床前深入研究奠定了坚实的基础。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种与耐ATRA急性髓系白血病细胞特异性结合的多肽及其制备方法和应用。

背景技术

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)是成年人最常见的血液系统的恶性肿瘤。化疗是目前最重要的治疗手段，也是造血干细胞移植的基础。但大多数患者最终仍因治疗失败而死亡。即使对于治疗最为成功的急性早幼粒细胞白血病(APL)，采用ATRA联合蒽环类药物或三氧化二砷(ATO)的优化治疗方案能够达到90％的初始完全缓解，但仍有20～30％的患者对全反式维甲酸(ATRA)产生耐药反应，三年总体生存率仅为50％左右。导致治疗失败的原因是多方面的，其中多药耐药是最重要的原因之一。目前研究认为，白血病细胞多药耐药的产生涉及诸多机制，包括以ABC转运蛋白为代表的膜分子介导的药物摄取减少和外排增多；药物在细胞内分布的改变等。大量研究发现，虽然肿瘤耐药的机制十分复杂，并且到目前为止仍不断有新的机制被发现，但很多机制殊途同归，最终导致胞内有效药物浓度低于治疗浓度阈值，无法达到治疗效果。并且已有研究表明，如果肿瘤细胞内部的抗肿瘤药物能够达到较高浓度，仍然能够有效地逆转大部分的肿瘤耐药。而耐药细胞特异性靶向多肽可以实现药物的靶向输送，进而有效提高肿瘤部位药物浓度。

全反式维甲酸(ATRA)联合以蒽环类药物为主的化疗是临床上急性早幼粒细胞白血病(AML)诱导缓解的首选疗法。然而ATRA耐药性的产生常常导致AML化疗失败，严重影响了ATRA的治疗效果。

噬菌体展示随机肽库筛选技术是筛选细胞特异性结合多肽的一种有效方法。通过将文库与靶细胞进行几轮“吸附-洗脱-扩增”的亲和筛选富集过程，即可将展示有与靶细胞特异性结合多肽的噬菌体克隆从文库中筛选出来，但是传统的噬菌体展示随机肽库筛选技术存在技术层面的缺陷，其中尤为突出的是，洗涤效率低下导致无法彻底清除非特异性结合噬菌体，而且会使得筛选结果的重复性差。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种与耐ATRA急性髓系白血病细胞特异性结合的多肽，该多肽是一种能与ATRA耐药性AML细胞特异性结合，而且具有良好的肿瘤靶向性的多肽。

本发明的另一个目的在于提供上述与ATRA耐药性AML细胞特异性结合的多肽的制备方法。

本发明的另一个目的是提供上述多肽在制备用于多药耐药AML的靶向治疗药物的应用。

技术方案：为了实现上述目的，如本发明所述的一种与能够与ATRA耐药性AML细胞特异性结合的多肽，命名为pepNo.5R5，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明所述与能够与ATRA耐药性AML细胞特异性结合的多肽，命名为pepNo.5R5，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明所述的产生与能够与ATRA耐药性AML细胞特异性结合的多肽得细胞株，所述细胞株的为保藏编号为CCTCC NO.C2018139，命名为HL-60R，即人原髓细胞白血病耐药细胞HL-60R。

本发明所述的与ATRA耐药性AML细胞特异性结合的多肽的制备方法，包括如下步骤：