[发明专利]一种检测‘丰华21’西瓜种子真实性和纯度的方法

说明书

本发明公开的一种检测‘丰华21’西瓜种子真伪和纯度的方法，该方法包括如下步骤：(1)筛选出在‘丰华21’父、母本和杂交种中呈现多态性且稳定的SSR引物；(2)制备‘丰华21’的SSR指纹图谱；(3)将待检测西瓜种子的SSR扩增带型与步骤(2)制备出的‘丰华21’SSR指纹图谱进行比对，如比对结果一致，则可以判定为真实的‘丰华21’西瓜杂交种。本发明的优点在于不受外界环境影响，在室内即可完成检测，对于亲缘关系较近的西瓜杂种也可区分出来，是一种准确、可靠、快速、方便、经济的检测‘丰华21’西瓜种子真伪和纯度的方法。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体为一种检测‘丰华21’西瓜种子真实性和纯度的方法。

背景技术

西瓜是一年生蔓性草本植物，目前在全世界各地均有种植。西瓜富含葡萄糖、果糖、苹果酸、氨基酸、番茄红素、类胡萝卜素及多种维生素和矿物质，而脂肪酸和胆固醇含量极低，既营养又保健，深受消费者喜爱。根据农业部最新统计，2016年我国西瓜的栽培面积约为2836万亩，总产量为7940万吨，居世界第一位，初步估计其年种子流通量在280万公斤左右。种子真实性和纯度检验是种子生产工作中不可缺少的重要步骤，是保证良种遗传性充分发挥，促进农业生产持续稳定、高产的有效措施；是防止良种混杂退化，提高种子质量和产品品质的必要手段。

西瓜杂交种制种过程中，由于隔离条件不严格或人工去雄不及时、不彻底等原因导致杂交一代种子不纯，从而影响杂交种的纯度。目前，西瓜杂交种真实性和纯度鉴定的传统方法是根据品种的形态性状进行鉴定，但这一方法存在易受环境影响、周期较长、费工占地的缺陷。近年来，国内外学者利用同工酶和蛋白质电泳图谱鉴定技术对西瓜杂交种进行了研究，但由于同工酶位点及蛋白质种类有限，对于亲缘关系较近的西瓜杂交种难以区分。

发明内容

为了解决现有技术中西瓜种子纯度检测多依赖于田间表型观察，存在易受环境影响、周期较长、费工占地、以及对于亲缘关系较近的西瓜杂交种难以区分的缺陷，本发明提供了一种检测‘丰华21’西瓜种子真实性和纯度的方法，实现的目的为，建立一种准确、可靠、快速、方便、经济的检测‘丰华21’西瓜种子真伪和纯度的方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为，本发明提供的一种检测‘丰华21’西瓜种子真实性和纯度的方法，包括如下步骤：

(1)根据已公布的西瓜基因组序列信息设计SSR引物，在所设计出的SSR引物中筛选出在‘丰华21’父、母本和杂交种中呈现多态性且稳定的SSR引物；

(2)利用步骤(1)最终筛选出来的SSR引物制备‘丰华21’SSR指纹图谱；

(3)对待检测的西瓜种子进行播种，CTAB法提取子叶期叶片的基因组DNA，利用步骤(1)中最终筛选出的SSR引物进行PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳，获得待检测种子的SSR扩增带型，通过与步骤(2)制备出的‘丰华21’SSR指纹图谱进行比对，如比对结果一致，则可以判定为真实的‘丰华21’西瓜杂交种。

进一步的，所述步骤(3)中还包括种子纯度的计算，将待测西瓜种子与步骤(2)制备出的‘丰华21’SSR指纹图谱进行比对后，采用如下公式计算得到种子纯度，

种子纯度＝(检测所得真种子数/检测种子总数)×100％……公式(一)。

本发明采用的分子标记方法来进行检测西瓜种子真实性和纯度的方法，DNA指纹图谱技术为品种真实性和纯度鉴定提供了准确、可靠、快速、方便的方法。DNA指纹图谱技术的优越性表现为：(1)分子标记数量大、多态性高，可鉴定表型难以鉴别的品种；(2)不受环境因素影响，可在生长发育的任何阶段鉴定；(3)样品DNA可长期保存，可用于追溯性鉴定；(4)利用DNA分子标记鉴定品种真伪，不仅准确可靠，而且便于实现自动化。分子标记是绘制品种指纹图谱的有力工具，相对于AFLP、RAPD和SRAP等分子标记，SSR分子标记具有数量丰富、多态性高、操作简便、重复性高和共显性等优点。