[发明专利]基于转录激活因子样效应物核酸酶的大肠杆菌O157:H7检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明属于食品安全检测分析技术领域，涉及一种基于转录激活因子样效应物核酸酶的大肠杆菌O157:H7检测试剂盒及检测方法。该试剂盒包括以下组份：(1)转录激活因子样效应物核酸酶；能够特异识别大肠杆菌O157:H7的16S rDNA；(2)“拟人”分子信标。利用该试剂盒或该检测方法，能够高灵敏的检测大肠杆菌O157:H7。

技术领域

本发明属于食品安全检测分析技术领域，更具体地，涉及一种基于转录激活因子样效应物核酸酶的大肠杆菌O157:H7检测试剂盒及检测方法。

背景技术

食源性致病菌污染是影响我国食品安全的最主要因素之一。其中大肠杆菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7)因其易发易感源头多而受到广泛关注。大肠杆菌O157:H7属于肠杆菌科埃希氏菌属，革兰氏染色阴性，可产生大量的Vero毒素(VT)，也称作类志贺氏毒素(SLT)，是主要致病因子。它的感染剂量极低，通常是突然发生剧烈腹痛和水样腹泻，数天后出现出血性腹泻，严重者可导致死亡。据报道，世界上迄今已有上百次大肠杆菌O157:H7感染性腹泻的爆发流行，目前大肠杆菌O157:H7病例已波及到五大洲，呈现世界流行之势。

目前，反复增菌实验以及菌落分离鉴别等实验是传统的食源性致病菌检测方法，耗时长，完成一次需要数天甚至十几天以上的时间，而且程序繁琐，也会因为样品细菌浓度过低给培养造成困难。除了传统方法以外，随着科学技术的进步，针对食源性致病菌检测的方法还包括免疫学方法和分子生物学实验法等比传统方法更灵敏、快捷的检测方法。基于免疫学基础建立的检测方法主要包括酶联免疫吸附法(ELISA)，该方法准确性高，但过程较为繁琐；基于分子生物学技术建立起来的方法主要包括聚合酶链式反应(PCR)技术、生物发光检测法以及环介导恒温扩增技术(LAMP)等，这些方法灵敏度高，具备准确、高效、自动化的特点，但需要对致病菌进行灭活处理，还要提取DNA，增加了过程的复杂度。随着人们对食品安全的愈发重视，如何更快更灵敏更便捷地检测食源性致病菌成为一个热门研究领域。

因此，现在亟需一种快速灵敏便捷的现场检测方法来检测大肠杆菌O157:H7，以保障食品安全和人民健康。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于转录激活因子样效应物核酸酶的大肠杆菌O157:H7检测试剂盒及检测方法。利用该试剂盒或该检测方法，能够高灵敏的检测大肠杆菌O157:H7。

为了实现上述目的，本发明的第一方面提供一种基于转录激活因子样效应物核酸酶的大肠杆菌O157:H7检测试剂盒，该试剂盒包括以下组份：

(1)转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)；能够特异识别大肠杆菌O157:H7的16S rDNA；具体地，TALENs能够特异性识别大肠杆菌O157:H7的16S rDNA中18bp长的一段序列，该序列一条链具有如下碱基序列：

5’-TGGCGGACGGGTGAGTAA-3’(SEQ ID NO：5)

(2)“拟人”分子信标，由以下部分组成：

发夹：5’-GATCAACTACTACTTGGTAAGGGTTTTTTTTTTTTTTTCCCTTTGTTTCTCTAATTAAGGC-3’(SEQ ID NO：1)；

其中，5’端第18位T碱基上和3’端第18位T碱基上分别连接有荧光基团和与其相应的猝灭基团；

左臂：

5’-TGGCGGACGGGTGAGTAATCCAAGTAGTAGTTGATC-3’(SEQ ID NO：2)；

右臂：5’-GCCTTAATTAGAGAAACTTTACTCACCCGTCCGCCA-3’(SEQ ID NO：3)；

左腿：5’-TTACTCACCCGTCCGCCA-3’(SEQ ID NO：4)；