[发明专利]一种CelB基因的用途有效
| 申请号： | 201810737276.6 | 申请日： | 2018-07-06 |
| 公开（公告）号： | CN108796104B | 公开（公告）日： | 2021-07-02 |
| 发明（设计）人： | 夏雪山;宋玉竹;杨光英 | 申请（专利权）人： | 云南科耀生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 650000 云南省昆明市昆明经*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 celb 基因 用途 | ||
1.一种CelB基因用于非疾病的诊断和治疗目的的鉴定肺炎克雷伯氏菌的用途，其特征在于，所述CelB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，根据所述CelB基因设计特异性引物，所述特异性引物包括一对外游引物和一对内游引物；
其中，所述外游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2-3所示，所述内游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4-5所示。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述鉴定肺炎克雷伯氏菌包括如下步骤：
(1)针对基因CelB设计特异性引物，包括一对外游引物；
(2)采集样本并进行增菌培养，提取DNA，得到待测模板；
(3)建立PCR鉴定体系，对待测模板进行检测；
或者，所述鉴定肺炎克雷伯氏菌包括如下步骤：
(1')针对基因CelB设计特异性引物，包括一对外游引物和一对内游引物；
(2')采集样本并进行增菌培养，提取DNA，得到待测模板；
(3')建立LAMP鉴定体系，对待测模板进行检测。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，在步骤(1)和步骤(1')之前还包括BLAST筛选步骤。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述BLAST筛选包括本地BLAST和在线BLAST。
6.如权利要求3所述的用途，其特征在于，步骤(3)所述PCR鉴定体系的反应体系为：10-15μL 2×PCR预混液，8-12μM的外游引物，40-60ng待测样品DNA。
7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述预混液包含1-3U DNA聚合酶、1-3mMMgCl2和180-220μM dNTP。
8.如权利要求3所述的用途，其特征在于，步骤(3)所述PCR鉴定体系的反应条件为：95℃预变性5min；95℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸，35个循环；72℃延伸2min。
9.如权利要求3所述的用途，其特征在于，步骤(3')所述LAMP鉴定体系的反应体系为：13-17μL 2×等温预混液，6-10μM内游引物，1-3μM外游引物，80-120ng待测样品DNA。
10.如权利要求3所述的用途，其特征在于，步骤(3')所述LAMP鉴定体系的反应条件为：63-68℃温育30min，80-98℃进行退火。
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