[发明专利]一种CelB基因的用途

说明书

本发明提供了一种CelB基因的用途，所述基因的Genbank登陆号为CP003785.1，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；本发明通过多重BLAST筛选分析发现基因名为CelB的肺炎克雷伯氏菌特异性基因，针对该基因设计内外游引物，构建了两种鉴定体系，优化了反应体系及流程，并进行灵敏度和特异性实验，证明该基因能有效鉴定或检测肺炎克雷伯氏菌，灵敏度高，特异性好，操作简便，具有广阔的应用前景和市场价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种CelB基因的用途。

背景技术

肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia，K.pneumonia)，属于肠杆菌科克雷伯氏菌属，革兰氏染色阴性，无鞭毛和芽孢，但有明显的荚膜和菌毛，绝大多数K.pneumonia还具有菌毛抗原、菌体抗原、荚膜抗原等多种主要抗原成分，其为兼性厌氧菌，对营养需求低，一般的LB平板培养基上过夜培养即可形成凸起、较大、灰白色的粘液型菌落，最适生长温度为37℃，肺炎克雷伯氏菌对人致病性较强，是重要的条件致病菌和医源性感染菌之一，在健康人的呼吸道和肠道正常菌丛中、自然界水和谷物中均能分离到克雷伯氏菌，外界环境中存在的肺炎克雷伯氏菌对免疫低下人群具有较大的健康威胁，受到肺炎克雷伯氏菌污染的食物与正常食物在外形与味觉上没有区别，因此准确、快速地检测肺炎克雷伯氏菌具有十分重要的意义。

CN101892300A提供一种肺炎克雷伯氏菌检测试剂盒，所述的肺炎克雷伯氏菌检测试剂盒包括以肺炎克雷伯氏菌的oppA基因为靶基因、基于环介导恒温扩增技术设计的两对引物：内引物FIP/BIP和外引物F3/B3。CN103642910A采用基因克隆技术，将肺炎克雷伯氏菌RecA基因片段插入到载体pMD18-T中，获得含有RecA基因片段的重组质粒，以此作为标准品，根据肺炎克雷伯氏菌RecA基因片段设计并合成一组特异性引物和探针，优化PCR反应条件，建立以实时荧光定量聚合酶链反应为平台的检测方法，并对所建立的方法进行有效性评估试验，但上述现有技术实验步骤繁琐，检测基因特异性差，周期漫长，准确度不高。

作为最常见的条件致病菌之一，肺炎克雷伯菌在环境中的存在情况也是值得重视的课题，目前常用的检测肺炎克雷伯氏菌的检测方法主要包括细菌分离鉴定、免疫学方法、分子生物学检测方法等，但这些方法都存在一些缺陷。传统的检测方法主要采用细菌前增菌培养、分离培养、菌落形态观察和一系列的生化鉴定以及血清型鉴定等步骤，一般需4至7天，操作繁琐，费时耗力；免疫学方法易污染，且交叉反应比较严重、假阳性多、灵敏度偏低；随着分子生物学和生物信息学的发展，陆续发现了一些病原菌保守的核酸序列，在此基础上建立了众多的检测技术，其中主要有核酸探针检测技术、实时荧光PCR检测技术、LAMP和PCR技术，这些方法因其特异性强、灵敏度高、省时等特点已越来越多的被应用于微生物鉴定中，但是这些方法用于对自然环境尤其是医院环境的检测和监测罕见报道。

因此，研发一种特异性良好、灵敏度较好、检测快速可靠、操作简单的肺炎克雷伯氏菌的鉴定体系对于提供公共环境的卫生水平具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。

发明内容

针对现有技术的不足及实际的需求，本发明提供一种CelB基因的用途，本发明通过多重BLAST筛选分析发现基因名为CelB的肺炎克雷伯氏菌特异性基因，针对该基因设计内外游引物，构建了两种鉴定体系，并进行灵敏度和特异性实验，证明该基因能有效鉴定或检测肺炎克雷伯氏菌，灵敏度高，特异性好，操作简便，具有广阔的应用前景和市场价值。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种CelB基因用于鉴定肺炎克雷伯氏菌的用途，所述基因的Genbank登陆号为CP003785.1，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：

SEQ ID NO.1: