[发明专利]同时检测猪链球菌通用型和猪链球菌2型的多重免疫荧光分析的引物、试剂盒及其方法

权利要求书

1.一种同时检测猪链球菌通用型和猪链球菌2型多重荧光免疫分析引物组，其特征在于，其核苷酸序列如下所示：

猪链球菌通用引物：

SS-UF：5'-TGGACAGATAAAGATGGAAATG-3'(SEQ ID NO：1)，

SS-UR：5'-GGAACTTCAAGATGGATTGG-3'(SEQ ID NO：2)；

猪链球菌2型引物：

SS-2F：5'-TAGACGCGTTTTAGGTTGGAA-3'(SEQ ID NO：3)，

SS-2R：5'-ACCAGACCGAT AAAACCATTTT-3'(SEQ ID NO：4)。

2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于：引物SS-UF和SS-2F的5’端还通过间隔臂序列添加有tag序列。

3.根据权利要求2所述的引物，其特征在于：引物SS-UF和SS-2F的5’端的tag序列分别为：

引物SS-UF的tag序列为：ATACTTTACAAACAAATAACACAC(SEQ ID NO：5)；

引物SS-2F的tag序列为：AATAACAACTCACTATATCATAAC(SEQ ID NO：6)。

4.根据权利要求1所述的引物，其特征在于：引物SS-UR和SS-2R的5’端还添加有生物素标记。

5.一种用于检测猪链球菌通用和猪链球菌2型多重荧光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括：(1)权利要求1-4任一项所述的引物组；(2)2种编码不同荧光色的包含有anti-tag序列的荧光编码微球，所述anti-tag序列能相应地与权利要求2或3中的tag序列互补配对；(3)链霉亲和素-藻红蛋白复合物。

6.一种用于检测猪链球菌通用型和猪链球菌2型的多重荧光免疫分析方法，包括如下步骤：

1)从样品中提取病原核酸；

2)以提取的病原核酸为模板，用权利要求1～4任一所述的引物进行PCR扩增；

3)将上步扩增产物、2种编码不同荧光色的荧光编码微球、链霉亲和素-藻红蛋白进行杂交；

4)杂交结束后，通过Luminex系统对杂交产物进行检测分析，确定样品中是否含有猪链球菌和猪链球菌2型。

上述方法用于非疾病的诊断和治疗。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤3)中的荧光编码微球上包被有特异的anti-tag序列，所述anti-tag序列能相应地与权利要求2中的tag序列互补配对。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤2)中PCR扩增的反应体系为：

。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：步骤2)中PCR扩增的反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，60℃退火90s，72℃延伸20s；循环35次；72℃终延伸10min。

10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤3)中所述杂交的反应体系和程序为：