[发明专利]同时检测猪链球菌通用型和猪链球菌2型的多重免疫荧光分析的引物、试剂盒及其方法

说明书

本发明公开了一种同时检测猪链球菌通用型和猪链球菌2型的多重免疫荧光分析的引物、试剂盒及其方法；旨在对同一样本中的多种不同目的分子同时进行检测，样本用量少，操作简单、快速，可大大降低检测成本，灵活性好，可以根据需要在此基础上加减检测病原种类的检测引物、试剂盒及其方法；所述引物组，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所述；所述猪链球菌2型引物核苷酸序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所述；属于核酸检验领域。

技术领域

本发明属于核酸检验领域，具体涉及一种同时检测猪链球菌通用型和猪链球菌2型的多重免疫荧光分析的引物、试剂盒及方法。

背景技术

猪链球菌(Streptococcus suis，SS)是一种分布十分广泛的人畜共患病病原菌，按荚膜多糖的差异，猪链球菌可以分为35个不同的血清型(1～34型和1/2型)，其中1、2、1/2、7、9、14型等具有致病性，以2型(SS2)毒力最强，分布范围最广。SS2首先于1945年由Bryante报道，在母猪或仔猪发生一种由链球菌引起的败血性传染病的流行，1996年Elliot对该菌进行了分离、鉴定，1968年丹麦首次报道人感染猪链球菌，之后，SS2在澳大利亚、美国、丹麦、泰国、新加坡、加拿大及欧洲和北美洲的许多国家导致猪群发病。该病不仅给养猪业带来严重的经济损失，还给人类公共卫生安全造成了严重的威胁。2005年6-8月，中国四川省暴发猪链球菌感染，发现病例204例，造成38人死亡，使该病的公共卫生学意义备受关注。

目前，常用的猪链球菌和分型方法有血清学方法和分子生物学方法，因此现在人们利用选择性培养基并进行血清特异性分离技术、免疫磁性分离技术等方方来检测猪链球菌2型，但这些方法通常费时又费力，而且灵敏度不高。近年来，随着分子生物学的发展，PCR技术已被广泛应用于病原的检测，并建立了多重PCR检测技术，同时检测几种病原，多重PCR因其灵敏性、特异性和操作的简单性被广泛应用于多种病原的混合感染，但其结果判定需要电泳，费时费力，且反应产物容易产生污染而导致假阳性，而多重PCR是靠片段的大小来区别的，一般到了三重以上，片段大小差别大，其每种病毒的扩增效率不一样，造成结果存在偏差。多重免疫荧光技术融合了PCR的多种优点，通过直接检测PCR反应过程中荧光信号的变化实现对目的分子的定量，不需要电泳检测。多重免疫荧光技术相对常规PCR在敏感性、特异性与速度等方面具有优势，相对于多重荧光定量PCR技术具有更多检测通道的优势，在实际应用中，当检测靶标数量大于3时，即同一份样品同时检测3种以上微生物指标时，荧光定量PCR技术受通道限制难以实现3重以上检测。而多重免疫荧光技术理论上可以同时检测100种检测指标，具有高通量的优势。本发明中的多重免疫荧光技术无需探针，降低了设计难度，同时节省了昂贵的探针成本。

发明内容

为了解决现有技术中所存在的不足，本发明的一个目的在于提供一种检测猪链球菌通用型和猪链球菌2型的多重荧光免疫分析引物组；

本发明的另一个目的在于提供一种检测检测猪链球菌通用型和猪链球菌2型的多重荧光免疫分析试剂盒；

本发明的另一个目的在于提供一种检测猪链球菌通用型和猪链球菌2型的多重荧光免疫分析方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种同时检测猪链球菌通用型和猪链球菌2型多重荧光免疫分析的引物组，其特征在于，其核苷酸序列如下所示：

猪链球菌通用引物：

SS-UF：5'-TGGACAGATAAAGATGGAAATG-3'(SEQ ID NO：1)，

SS-UR：5'-GGAACTTCAAGATGGATTGG-3'(SEQ ID NO：2)；

猪链球菌2型引物：

SS-2F：5'-TAGACGCGTTTTAGGTTGGAA-3'(SEQ ID NO：3)，