[发明专利]一种新型细胞添加剂的制备方法及其产品

说明书

本发明提供了一种新型细胞添加剂的制备方法及其产品，涉及血脂异常相关疾病的体外细胞研究领域，该方法将高温溶解的硬脂酸组分溶液加入常温溶解的BSA组分溶液中振荡混匀，充分振荡结合后，经过滤除菌即可得新型细胞添加剂产品。本发明提出的制备方法能够解决现有硬脂酸或硬脂酸钠配制过程中存在的溶剂毒性、溶解困难、易析出等技术问题，具有硬脂酸或硬脂酸钠浓度精确可控、产品稳定性好、易储存等优点，生产出的新型细胞添加剂属于即用型产品。

技术领域

本发明涉及血脂异常相关疾病的体外细胞研究领域，具体涉及一种新型细胞添加剂的制备方法及其产品。

背景技术

近年来，我国经济的发展促使居民膳食结构由低脂肪向高脂肪模式转变，据《中国居民营养与慢性病状况调查（2015年）》报道，中国成人血脂异常患病率高达39.9-40.8%。血脂异常主要表现为高甘油三酯和游离脂肪酸血症，造成组织器官的慢性损伤，导致2型糖尿病、肥胖症、脂肪肝等血脂异常相关疾病的发生，这种现象称为脂毒性。

在体外研究中，为了模拟高甘油三酯和游离脂肪酸血症所致的细胞损伤，通常需要在细胞培养基中添加高浓度的饱和游离脂肪酸。除软脂酸外，硬脂酸（Stearic acid）是人体内含量最丰富的饱和游离脂肪酸，占血浆游离脂肪酸总量的12%。正常情况下，人体血液中硬脂酸的浓度维持在生理范围内，血脂异常患者血液中硬脂酸浓度显著增高。硬脂酸钠（Sodium stearate）是硬脂酸的钠盐，同等摩尔浓度的硬脂酸钠与硬脂酸对体外培养的细胞产生相同的作用。因此，硬脂酸/硬脂酸钠常用于体外模拟高甘油三酯和游离脂肪酸血症所致的细胞损伤。

然而，硬脂酸或硬脂酸钠呈固态，难溶于水，无法直接用于血脂异常相关疾病的体外研究。目前，市场上尚无即用型硬脂酸或硬脂酸钠细胞添加剂，加上配制方法不当，导致很多从事血脂异常相关疾病研究的科研工作者无法顺利开展体外细胞实验。

现有技术中，有人采用甲醇、乙醇、二甲基亚砜等有机溶剂，盐酸/硫酸、氢氧化钠溶液等强酸强碱类溶剂溶解硬脂酸或硬脂酸钠，然而，这些溶剂既对细胞具有毒性，也不能有效溶解硬脂酸或硬脂酸钠。此外，有人利用牛血清白蛋白（BSA）可与自由脂肪酸结合的特点，采用高浓度的BSA溶液配制硬脂酸或硬脂酸钠。该方法的优点是溶剂本身对细胞无毒性，但仍存在以下问题：1.对BSA未进行甄选，使用未脱脂的BSA，导致其结合力不足，且硬脂酸或硬脂酸钠的精确浓度不可控；2.未掌握溶解硬脂酸或硬脂酸钠的合适条件，不能充分溶解自由脂肪酸；3.配制的BSA-自由脂肪酸不符合生理情况下的摩尔比例，很快有固体析出，不能有效发挥脂毒性。

发明内容

有鉴于此，本专利的目的在于针对当前本领域的技术空白，提供一种即用型硬脂酸、硬脂酸钠细胞添加剂及其制备方法，该配制方法能够解决现有硬脂酸或硬脂酸钠配制过程中存在的溶剂毒性、溶解困难、易析出等技术问题，具有硬脂酸或硬脂酸钠浓度精确可控、产品稳定性好、使用方便、易储存等优点。

为了实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种新型细胞添加剂的制备方法，其特征在于，将高温溶解的硬脂酸组分溶液加入常温溶解的BSA组分溶液中振荡混匀，充分振荡结合后，经过滤除菌即可得新型细胞添加剂，其中：所述硬脂酸组分溶液的浓度为0.15-9mmol/L，所述BSA组分溶液的浓度为0.025-6mmol/L。

进一步的，所述高温溶解的硬脂酸组分溶液的配置方法包括如下步骤：将硬脂酸组分倒入缓冲液中并置于70-100℃的温度下加热溶解，待硬脂酸组分完全溶解于缓冲液后，保持70-100℃的高温，得高温溶解的硬脂酸组分溶液。

进一步的，所述将硬脂酸组分倒入缓冲液中并置于70-100℃的温度下加热溶解包括：将硬脂酸组分倒入盛有缓冲液的容器中并置于70-100℃水浴锅中加热溶解，其中：所述缓冲液的PH为7.2-7.5、且包括磷酸盐缓冲液、水、生理盐水、细胞培养基中的一种。