[发明专利]一种检测磺脲类个体化用药相关基因SNP位点的引物及方法

说明书

本发明涉及一种用于检测磺脲类个体化用药相关基因SNP位点的引物及方法，所述的引物可对TCF7L2基因rs7903146(C/T)位点进行检测，所述的引物序列包括野生型上游引物、突变型上游引物、共用下游引物；本发明在ARMS‑PCR基础上做了改进，针对SNP序列设计的特异性引物及共用下游引物，特异性引物于3’末端第三位引入错配碱基，以此扩大特异性引物3’末端碱基与DNA模版上SNP位点碱基互补和不互补情况下扩增效率间的差距，从而大幅度提高检测的特异性和准确性；引入Real‑time PCR技术，可根据△ct值进行判读，即△Ct＝突变Ct－野生Ct，一般情况下△Ct＞7为野生型，△Ct＜‑7为突变型，‑2＜△Ct＜2为杂合型。本发明的优点是，操作简单、结果直观，检测时间短，成本低且特异性高。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种检测磺脲类个体化用药相关基因SNP位点的引物及方法。

背景技术

糖尿病是由胰岛素缺乏或生物效应降低所致的内分泌代谢疾病，其发病率逐年上升。世界卫生组织指出，2025年全世界将出现3.8亿名糖尿病患者。2012年1月9日，中国健康教育中心公布的“中国慢性病监测及糖尿病患病率为2.6％，60岁以上老年人患病率高达19.6％，全国有成年糖尿病患者9700万人，已超越印度成为全球糖尿病人数最多的国家”，给患者的身心健康及经济造成沉重的负担。磺脲类药物不仅降糖作用强，还可减少或延缓2型糖尿病慢性并发症的发生，特别是微血管并发症，被多个国内外成人2型糖尿病防治指南推荐为一线备选或二线降糖用药，可作为二甲双胍不耐受或存在禁忌症者的起始治疗或二甲双胍治疗血糖控制不佳时的联合用药之一。研究报道，对于大多数新诊断的2型糖尿病患者，磺脲类药物可使空腹血糖下降50～80mg/dl，使HbAlc(糖化血红蛋白)下降1.0％～2.5％。但其临床应用仍然存在一些问题，如据某项研究报告，每年有5–7％服用磺脲类的患者发生继发性无效；一项大规模随机试验、ADOPT表明，单用磺脲类5年失效率(禁食血糖>180mg/dl)高达34％，而罗格列酮为15％；二甲双胍为21％；UKPDS试验表明，每年约有1％服用磺脲类的患者发生严重低血糖。因此，探讨决定其个体疗效差异的基因多态性位点，是实现糖尿病精准医学的第一步，通过基因分型检测，可以更有效的指导医生进行个体化用药治疗，提高磺脲类药物的治疗水平。

磺脲类药物为促胰岛素分泌剂，主要作用机制是能紧密结合胰腺β细胞的KATP通道，从而模拟完整的葡萄糖传感机制，促进胰腺β细胞的胰岛素分泌，克服肝和外周胰岛素抵抗，缓解β细胞胰岛素分泌不足。TCF7L2(转录因子7类似物2)，又名T细胞转录因子-4(TCF-4)基因位于染色体10q25，全长217kb，226bp，由14个外显子和13个内含子组成。TCF7L2可通过激活Wnt信号通路，影响β细胞的存活与分泌及胰高血糖素肽1(GLP-1)的分泌，导致胰岛素的分泌缺陷和不足，促使糖尿病的发生。研究报道，TCF7L2的rs7903146(C/T)位点多态性与磺脲类药物治疗效果密切相关，等位基因T是2型糖尿病患者发病危险基因，TT/CT基因型是患者发病的危险基因型。接受格列齐特磺脲类药物治疗后CC基因型患者空腹血糖(FPG)及糖化血红蛋白(HbA1c)水平相对CT/TT基因型患者低，因此，通过检测TCF7L2的rs7903146位点多态性，可指导临床医生合理用药。