[发明专利]一种永久标记细胞核的慢病毒表达载体及标记方法

权利要求书

1.一种用于标记细胞核的慢病毒表达载体，其特征在于，所述慢病毒表达载体的表达区包含核定位荧光标记、荧光标记序列，所述核定位荧光标记中核定位信号序列连接于荧光蛋白序列上游；

其中荧光标记与核定位荧光标记编码的蛋白呈现不同颜色的荧光信号。

2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述核定位信号序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示。

3.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述核定位信号序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

4.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述核定位荧光标记中荧光蛋白为EGFP，所述荧光标记中荧光蛋白为RFP。

5.病毒颗粒，其特征在于，所述病毒颗粒由权利要求1所述慢病毒表达载体经病毒包装获得。

6.永久标记细胞，其特征在于，所述永久标记细胞由权利要求5所述的病毒颗粒感染细胞获得。

7.一种可永久标记细胞核的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述的慢病毒表达载体。

8.一种标记细胞核的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)克隆获得核定位荧光标记序列，其序列中核定位信号序列连接于荧光蛋白序列上游；

2)步骤1)所述序列连接到表达荧光标记的慢病毒表达载体上，获得重组表达载体，其中慢病毒表达载体的荧光标记与步骤1)的核定位荧光标记呈现不同颜色的荧光信号；

3)步骤2)获得的重组表达载体转化感受态细胞，提取质粒，得重组质粒；

4)重组质粒转染可用于病毒包装的细胞，培养后取上清，获得病毒颗粒；

5)步骤4)所述病毒颗粒感染目的细胞，培养后筛选阳性细胞，获得荧光标记细胞核的目的细胞。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤1)所述核定位荧光标记序列为NSL-EGFP序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；步骤2)所述慢病毒表达载体为pCDH-CMV-MCS-EF1-RFP载体。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤4)所述可用于病毒包装的细胞为293FT细胞。