[发明专利]从茶花粉中分离纯化对羟基肉桂酸乙酯的方法及其应用

权利要求书

1.一种从茶花粉中分离纯化对羟基肉桂酸乙酯的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、提取：取粉碎的茶花粉，按料液比1g:5mL-25mL加入80%-95%的乙醇，于30℃-70℃下水浴浸提6h，共提取3次，抽滤，合并滤液，并于50℃下减压浓缩成浸膏，得粗提物；

S2、萃取：粗提物按料液比1g:10mL加入蒸馏水，搅拌溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，均萃取3次，而后将它们分别置于50℃旋转蒸发仪中减压浓缩，得石油醚相、乙酸乙酯相及正丁醇相；

S3、大孔吸附树脂层析：取乙酸乙酯相，按料液比1g:10mL加入蒸馏水复溶，振荡，4500r/min离心12min，取上清液加入大孔树脂中，大孔树脂置于37℃下150r/min的摇床中吸附16h，将吸附后的大孔树脂装柱，使用不同浓度的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱体积均为5个柱体积，收集各洗脱组分，得大孔树脂30%乙醇洗脱相；

S4、酸解：取大孔树脂30%乙醇洗脱相 ,按料液比0.1g:50mL加入无水乙醇,而后再加入等体积4M的盐酸,于90℃水浴中酸水解90min,将酸解液置于50℃旋转蒸发仪上减压蒸干，获得大孔树脂30%乙醇洗脱相酸解物；

S5、HSCCC制备分离：配置正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶液体系，体积比为4:6:4:6，充分震荡，静置分层，分别收集上相和下相溶液，超声脱气，上相为固定相，下相为流动相，采用头-尾洗脱，将固定相以30mL/min的流速泵满色谱柱，稳定后，调节转速至700rpm-900rpm，将流动相以3mL/min-6mL/min的流速泵入色谱柱中；两相达平衡后由进样阀进入样品溶液，样品溶液为30%乙醇洗脱相酸解物,同时通过紫外检测器检测流出物，紫外检测波长设置为280nm，根据峰行收集各组分；

S6、组分鉴定：将步骤S5收集到的组分按顺序编号，以对羟基肉桂酸乙酯标准品作为对照，利用高效液相色谱、核磁共振、质谱的方法进行鉴定，即可确定某一编号对应的组分为对羟基肉桂酸乙酯。

2.如权利要求1所述的一种从茶花粉中分离纯化对羟基肉桂酸乙酯的方法，其特征在于：所述步骤S1中，茶花粉与乙醇的料液比为1g:10mL。

3.如权利要求1所述的一种从茶花粉中分离纯化对羟基肉桂酸乙酯的方法，其特征在于：所述步骤S1中粉碎的茶花粉是经高速万能粉碎机粉碎后，过40目的筛获得。

4.如权利要求1所述的一种从茶花粉中分离纯化对羟基肉桂酸乙酯的方法，其特征在于：所述步骤S1中，茶花粉水浴浸提温度为50℃。

5.如权利要求1所述的一种从茶花粉中分离纯化对羟基肉桂酸乙酯的方法，其特征在于：所述步骤S3中不同浓度的乙醇水溶液进行洗脱，其洗脱条件为：依次用浓度0%、10%、30%的乙醇水溶液进行洗脱。

6.如权利要求1所述的一种从茶花粉中分离纯化对羟基肉桂酸乙酯的方法，其特征在于：所述步骤S5中，转速设置为850rpm，流动相的流速控制在3mL/min。

7.如权利要求1所述的一种从茶花粉中分离纯化对羟基肉桂酸乙酯的方法，其特征在于：所述步骤S3中，大孔树脂采用HP-20型。