[发明专利]一种鹅源肾型星状病毒GoAstV快速诊断引物探针组、检测方法及应用在审
| 申请号： | 201810746155.8 | 申请日： | 2018-07-09 |
| 公开（公告）号： | CN108823333A | 公开（公告）日： | 2018-11-16 |
| 发明（设计）人： | 袁小远;孟凯;王友令;张玉霞;艾武;亓丽红 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院家禽研究所(山东省无特定病原鸡研究中心） |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 李桂存 |
| 地址： | 250000 *** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 引物探针 快速诊断 星状病毒 淬灭荧光基团 基因检测技术 基础研究 探针标记 探针引物 应用研究 荧光基团 高通量 检测 应用 污染 | ||
1.一种鹅源肾型星状病毒GoAstV快速诊断引物探针组，其特征在于，包括以下序列的探针引物组：
GoAstV-F：5' TGGTGGTGGTGCGGTTTT 3'；
GoAstV-R：5' GGGCAACGTACCATCATAACG 3'；
以及TaqMan MGB探针：5' FAM TGTAGAGACGGACTGGAC MGB 3'；
所述探针标记5'端为荧光基团，3'端为淬灭荧光基团。
2.根据权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，所述荧光基团为FAM，所述淬灭荧光基团为MGB。
3.一种利用权利要求1或2所述的引物探针组进行的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）RNA提取及反转录；
（2）标准曲线的绘制及敏感性检测。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述敏感性检测的方法为：将构建的质粒AstV393通过Nano Drop微量分光光度计测定质粒浓度，以所提取的质粒10倍稀释系列进行敏感性检测；其中所述AstV393质粒构建方法为：将GoAstV 1b蛋白片段克隆至PMD18T筛选的阳性质粒。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述AstV393质粒构建的具体步骤如下：Premix Ex Taq 12.5μL 、20 μM上下游引物1b-F和1b-R 各1μL 、 cDNA 模板2μL、ddH2O 8.5μL；反应过程：94℃ 15S、50℃ 20S、72℃ 30S进行35个循环，最后72℃延伸7min。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述 上下游引物的序列为：1b-F ：5'CGGTGGAATACATCAGCGAGTA 3'；
1b-R：5'CCTTCCTTATTGACACAAGCCTAT3'。
7.权利要求1或2所述的引物探针组在快速鉴别诊断鹅源肾型星状病毒GoAstV中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于山东省农业科学院家禽研究所(山东省无特定病原鸡研究中心），未经山东省农业科学院家禽研究所(山东省无特定病原鸡研究中心）许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810746155.8/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
