[发明专利]一种鹅源肾型星状病毒GoAstV快速诊断引物探针组、检测方法及应用

说明书

本发明属于基因检测技术领域，尤其涉及一种鹅源肾型星状病毒GoAstV快速诊断引物探针组、检测方法及应用。一种鹅源肾型星状病毒GoAstV快速诊断引物探针组，包括以下序列的探针引物组：GoAstV‑F：5'TGGTGGTGGTGCGGTTTT 3'；GoAstV‑R：5'GGGCAACGTACCATCATAACG 3'；以及TaqMan MGB探针：5'FAM TGTAGAGACGGACTGGAC MGB 3'；所述探针标记5'端为荧光基团，3'端为淬灭荧光基团。本发明提供的引物探针组具备更高的敏感性、特异性、重复性好，快速、高通量、污染少等优点，使其成为基础研究、应用研究等领域有用而强大的技术。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，尤其涉及一种鹅源肾型星状病毒GoAstV快速诊断引物探针组、检测方法及应用。

背景技术

星状病毒(Astrovirus）是一种属于星状病毒科的单股正链RNA病毒，基因组长度在6.4~7.9kb不等。星状病毒科根据感染宿主的不同可分为哺乳动物属和禽类属，其中哺乳动物属根据宿主的不同又分为人星状病毒、猫星状病毒、猪星状病毒、绵羊星状病毒以及貂星状病毒；禽类星状病毒属包括鸭星状病毒（DAstV）、火鸡星状病毒（TAstV）、禽肾炎病毒（ANV）和鸡星状病毒（CAstV）。2017年下半年以来，山东地区陆续从鹅病料中分离到新型的鹅源星状病毒。遗传进化分析发现，该新发病毒与之前报道的所有禽类星状病毒的基因型差异较大，与其他禽类的星状病毒同源性仅在30%-50.5%之间，属于新型的鹅源肾型星状病毒GoAstV。该病可引起病鹅的关节肿大，死淘率可达30%以上；剖解可见肾脏有明显的尿酸盐析出。关于该病毒的诊断，传统的病毒分离鉴定，费时费力，不适合临床使用，而且该病毒无血凝性，在鸡胚、鸭胚上不生长，在鹅胚上的繁殖能力也不高。目前最常见的是应用普通RT-PCR方法检测GoAstV，但该方法易造成标本间的交叉污染，而且需要进行凝胶电泳进行判断，亦不适合临床大批样品进行检测。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种鹅源肾型星状病毒GoAstV快速诊断引物探针组、检测方法及应用。

本发明还提供了一种利用上述探针引物组的检测方法及应用。

本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为：

一种鹅源肾型星状病毒GoAstV快速诊断引物探针组，包括以下序列的探针引物组：

GoAstV-F：5' TGGTGGTGGTGCGGTTTT 3'；

GoAstV-R：5' GGGCAACGTACCATCATAACG 3'；

以及TaqMan MGB探针：5' FAM TGTAGAGACGGACTGGAC MGB 3'；

所述探针标记5'端为荧光基团，3'端为淬灭荧光基团。

优选地，所述荧光基团为FAM，所述淬灭荧光基团为MGB。

一种利用上述引物探针组进行的检测方法，包括以下步骤：

（1）RNA提取及反转录；

（2）标准曲线的绘制及敏感性检测。

优选地，所述敏感性检测的方法为：将构建的质粒AstV393通过Nano Drop微量分光光度计测定质粒浓度，以所提取的质粒10倍稀释系列进行敏感性检测；其中所述AstV393质粒构建方法为：将GoAstV 1b蛋白片段克隆至PMD18T筛选的阳性质粒。

优选地，所述AstV393质粒构建的具体步骤如下：Premix Ex Taq 12.5μL 、20 μM上下游引物1b-F和1b-R 各1μL 、 cDNA 模板2μL、 ddH2O 8.5μL；反应过程：94℃ 15S、50℃20S、72℃ 30S进行35个循环，最后72℃延伸7min。