[发明专利]一种鉴别铁皮石斛和霍山石斛的ISSR引物及其方法在审
| 申请号： | 201810751513.4 | 申请日： | 2018-07-10 |
| 公开（公告）号： | CN108588269A | 公开（公告）日： | 2018-09-28 |
| 发明（设计）人： | 段媛媛;游景茂;卢超;郭杰;郭晓亮;周武先 | 申请（专利权）人： | 湖北省农业科学院中药材研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 夏艳 |
| 地址： | 445000 湖北省*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 霍山石斛 铁皮石斛 引物 鉴别 核苷酸序列 遗传关系 扩增 节约 应用 优化 分析 | ||
1.一种鉴别铁皮石斛和霍山石斛的ISSR引物，其特征在于，所述的ISSR引物包括UBC817、UBC826、UBC827、UBC834、UBC842或UBC849，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1～6所示。
2.一种鉴别铁皮石斛和霍山石斛的ISSR-PCR反应体系，其特征在于，包括以下步骤：
1)采集铁皮石斛和霍山石斛的嫩叶，用于提取植物组DNA；
2)采用1％琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性；
3)采用ISSR-PCR反应体系对步骤(1)所提取的DNA样品进行扩增。
3.根据权利要求2所述的反应体系，其特征在于，所述的ISSR-PCR反应所用的引物为UBC817、UBC826、UBC827、UBC834、UBC842或UBC849。
4.根据权利要求2所述的反应体系，其特征在于，所述的ISSR-PCR的扩增体系为：20μL的反应体系中含有2×Taq Master Mix 11.5μL，模板DNA 35ng，引物0.4μM。
5.根据权利要求2所述的反应体系，其特征在于，所述的ISSR-PCR的扩增程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s，52.2～56.2℃退火30s，72℃延伸1.5min，循环35次，72℃再延伸10min，4℃保存。
6.权利要求1所述的引物在鉴别铁皮石斛和霍山石斛中的应用。
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