[发明专利]一种用流式细胞术验证植物化感作用的方法

权利要求书

1.一种用流式细胞术验证植物化感作用的方法，其特征是包括如下步骤：

1）植物样品流式数据的收集与分析；

2）化感作用对细胞危害的验证；

所述的步骤1）具体包括：

（1）准备实验材料及器具：

选用过滤网为40微米的细胞分选管、切片刀、无菌培养皿、1mL移液器、一次性塑料培养皿15皿、预培养20天的井栏边草配子体、三叶鬼针草根系分泌物、流式细胞仪、解离液；

（2）实验处理：

①取预培养20天的井栏边草配子体，放入含有10mL质量浓度梯度分别为100%、50%、25%、12.5%以及0%的三叶鬼针草根系分泌物的水浸液的一次性塑料培养皿中，保持每皿含有100枚配子体，每组质量浓度梯度有三个平行组；浸泡时间为10天，在第10天进行流式细胞术检测；

②用镊子取出配子体，置于小型锥形瓶中用去离子水流水冲洗30min，后用灭菌纱布控干待用；

③将清洗干净的配子体植物组织材料称取0.5g，置于无菌培养皿中，加入预配好的解离液10mL，需没过植物组织材料；随后用切片刀上下快速均匀切割植物组织材料；待植物组织材料切成浆状后，静置5min，用移液器来回吹打3min；随后将植物组织材料通过过滤网为40微米的细胞分选管，得到澄清溶液；加入50μL/mL浓度的碘化丙啶，置于暗箱暗处理10min；

（3）上样：采用流式细胞仪进行，具体操作步骤如下：（1）打开液流抽屉，确认气压阀处于减压状态；打开金属挡板；取出鞘液桶，倒掉废液，拧紧鞘液桶盖，安上金属挡板，保证管路畅通无扭曲；（2）依此接通电源、打开稳压器电源、变压器电源，稳定5分钟；（3）将压力阀置于加压位置，轻拍过滤器，使气泡位于滤器的上方，打开管路开关，将过滤器中的气泡排除，关闭管路开关；（4）结束后自动STANDBY选项，5分钟后即可进行试验；

（4）实验数据分析：根据流式细胞仪分析软件测定不同根系分泌物质量浓度下的植物细胞死亡率，并进行对比，得出实验结论；

所述的步骤2）具体包括：

细胞膜脂过氧化物MDA的含量测定：取质量浓度梯度分别为100%、50%、25%、12.5%以及0%的三叶鬼针草根系分泌物处理过的井栏边草配子体植物组织材料，采用硫代巴比妥酸法测定配子体中MDA的含量。