[发明专利]一种快速鉴定苗期日本看麦娘、看麦娘的分子检测方法和试剂盒在审
| 申请号： | 201810754235.8 | 申请日： | 2018-07-11 |
| 公开（公告）号： | CN108796046A | 公开（公告）日： | 2018-11-13 |
| 发明（设计）人： | 周凤艳;张勇;沈艳;姚传春;刘小林;高同春 | 申请（专利权）人： | 安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 合肥国和专利代理事务所(普通合伙) 34131 | 代理人： | 孙永刚 |
| 地址： | 230031 安*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 日本看麦娘 分子检测 快速鉴定 看麦娘 试剂盒 琼脂糖凝胶电泳 特异性引物 基因组DNA 待测样品 恒温扩增 快速检测 特异性强 颜色变化 荧光染料 常规PCR 灵敏度 粗提 观察 扩增 | ||
1.一种快速鉴定苗期日本看麦娘、看麦娘的分子检测方法，其特征在于，包括以下步骤:
(1)、分别提取待测样品的基因组DNA；
(2)、设计特异性引物，进行LAMP恒温扩增；
(3)、在LAMP扩增产物中加入荧光染料，观察其颜色变化；和/或，在琼脂糖凝胶电泳上分离，观察扩增结果；
(4)、根据结果，鉴定是否为日本看麦娘。
2.如权利要求1所述的一种快速鉴定苗期日本看麦娘、看麦娘的分子检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中特异性引物为在日本看麦娘的保守基因ITS上设计的1对外引物和1对内引物。
3.如权利要求1或2所述的一种快速鉴定苗期日本看麦娘、看麦娘的分子检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中的两对引物分别是：
F3:5’-gcctcggggtaaaagaacc-3’
B3:5’-cgcgggattctgcaattcac-3’
FIP:5’-ggctagcaagccagccgcagcgccgaaggcgtcaa-3’
BIP:5’-atccacatgactctcggcaacg-3’。
4.如权利要求1所述的一种快速鉴定苗期日本看麦娘、看麦娘的分子检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中LAMP恒温扩增反应体系：
5.如权利要求1所述的一种快速鉴定苗期日本看麦娘、看麦娘的分子检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中LAMP恒温扩增反应温度为60℃--66℃。
6.如权利要求1所述的一种快速鉴定苗期日本看麦娘、看麦娘的分子检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中LAMP恒温扩增反应条件为63℃60min，80℃10min。
7.如权利要求1所述的一种快速鉴定苗期日本看麦娘、看麦娘的分子检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中在3.0％琼脂糖凝胶电泳上分离，观察扩增结果。
8.如权利要求1所述的一种快速鉴定苗期日本看麦娘、看麦娘的分子检测方法，其特征在于，所述步骤(3)荧光染料为SYBR Green Ⅰ。
9.如权利要求1所述的一种快速鉴定苗期日本看麦娘、看麦娘的分子检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中鉴定是否为日本看麦娘通过LAMP扩增产物颜色和电泳图谱条带进行判断。
10.一种用于快速鉴定苗期日本看麦娘、看麦娘的检测试剂盒，包含如下反应体系：
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