[发明专利]一种大规模生产蜕膜间充质干细胞活性因子的方法及其应用在审
申请号: | 201810755054.7 | 申请日: | 2018-07-11 |
公开(公告)号: | CN109097391A | 公开(公告)日: | 2018-12-28 |
发明(设计)人: | 刘云城;曾桂芳;梁晓;彭浩;陈康卓;刘沐芸;胡祥 | 申请(专利权)人: | 个体化细胞治疗技术国家地方联合工程实验室(深圳);深圳科诺医学检验实验室 |
主分类号: | C12N15/85 | 分类号: | C12N15/85;C12P21/02;C12N5/10;C07K14/52 |
代理公司: | 南京正联知识产权代理有限公司 32243 | 代理人: | 卢霞 |
地址: | 518000 广东省深圳市南山区粤*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 间充质干细胞 活性因子 蜕膜 悬浮 生物反应器 低温真空 驯化 冻干 生物学活性功能 基因工程改造 基因工程手段 分离提取 扩大培养 悬浮细胞 上清液 细胞株 分泌 保健品 化妆品 应用 改造 健康 生产 | ||
本发明提供了一种大规模生产蜕膜间充质干细胞活性因子的方法,包括分离提取健康人蜕膜间充质干细胞;经基因工程改造后进行悬浮驯化,通过生物反应器悬浮扩大培养,收集大量上清液;通过特有低温真空冻干技术制成蜕膜间充质干细胞活性因子。本发明的有益效果是:基于基因工程手段改造蜕膜间充质干细胞并进行悬浮驯化获得悬浮细胞株,此细胞株能够分泌更高水平的活性因子,并且能够通过生物反应器大规模生产,大大降低生产成本。并且此方法通过特殊的低温真空冻干技术,获得活性因子纯度、稳定性更高。通过此方法生产的蜕膜间充质干细胞活性因子在具有生物学活性功能的产品,如化妆品或保健品中应用,具有更高的社会及经济效益。
技术领域
本发明涉及一种活性因子技术领域,特别涉及一种大规模生产蜕膜间充质干细胞活性因子的方法及其应用。
背景技术
蜕膜间充质干细胞是一种分离自健康个体胎盘蜕膜的成体干细胞。蜕膜间充质干细胞能够分泌许多细胞因子如EGF、bFGF、TGF-β、HGF、IGF等及许多干细胞外泌体。蜕膜间充质干细胞及其分泌活性因子在再生医学领域已经得到广泛的研究和应用。
蜕膜间充质干细胞是一种贴壁依赖性细胞,传统的贴壁培养的制备工艺复杂,需要许多经验丰富的技术人员,加上过程中的大量设备、耗材的投入,导致蜕膜间充质干细胞活性因子的制备成本高昂,而且所获得的活性因子含量也不高,大大影响了蜕膜间充质干细胞活性因子的产品开发。传统的制备工艺均是在含血清、含抗生素的条件下进行,会引入许多风险因素,影响活性因子的纯度,给产品开发带来一系列的困难。
发明内容
本发明的目的在于提供一种大规模生产蜕膜间充质干细胞活性因子的方法,此方法在于通过基因工程手段改造蜕膜间充质干细胞并进行悬浮驯化获得悬浮细胞株,此细胞株能够分泌更高水平的活性因子,并且能够通过生物反应器大规模生产,大大降低生产成本。
本发明的另一个目的在于提供一种大规模生产蜕膜间充质干细胞活性因子的方法,此方法为无血清、无抗生素培养,风险因素大大减小。
本发明的另一个目的在于一种大规模生产蜕膜间充质干细胞活性因子的方法,此方法通过特殊的低温真空冻干技术,获得活性因子纯度、稳定性更高。
本发明的另一个目的在于一种大规模生产蜕膜间充质干细胞活性因子在具有生物学活性功能的产品,如化妆品或保健品中应用,具有极高的社会及经济效益。
本发明意外地发现,如果利用h-siat7e真核表达载体转染蜕膜间充质干细胞,可以将贴壁培养的蜕膜间充质干细胞驯化为悬浮培养,且悬浮培养的细胞能够分泌更多的活性因子。
本发明采用如下技术方案:
一种大规模生产蜕膜间充质干细胞活性因子的方法,其特征在于,包括以下步骤:
a)分离提取健康人蜕膜间充质干细胞;
b)经基因工程改造后进行悬浮驯化,通过生物反应器悬浮扩大培养,收集大量上清液;
c)通过特有低温真空冻干技术制成蜕膜间充质干细胞活性因子。
所述的步骤b)中,悬浮驯化方法如下:通过h-siat7e真核表达载体转染蜕膜间充质干细胞,通过无血清悬浮培养培养基不断进行贴壁-悬浮间隔培养筛选出悬浮蜕膜间充质干细胞细胞株,命名为Siat7e-DPMSC,进而通过生物反应器扩大培养,收集培养上清。
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