[发明专利]一株表达多聚磷酸激酶的重组菌及其应用有效
| 申请号： | 201810755901.X | 申请日： | 2018-07-11 |
| 公开（公告）号： | CN108795958B | 公开（公告）日： | 2020-04-07 |
| 发明（设计）人： | 应汉杰;丁梦林;牛欢青;王骏之;柳东;庄伟;朱晨杰;陈勇 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/54 | 分类号： | C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12N9/12;C12P19/32;C12R1/19 |
| 代理公司： | 江苏圣典律师事务所 32237 | 代理人： | 胡建华 |
| 地址： | 210000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表达 磷酸 激酶 重组 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种编码多聚磷酸激酶的PPK基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。
2.含有权利要求1所述PPK基因的重组载体。
3.根据权利要求2所述的重组载体，其特征在于，所述出发载体为pET28a。
4.含有权利要求2或3任意一项所述重组载体的重组菌。
5.根据权利要求4所述的重组菌，其特征在于，所述宿主菌为Escherichia coliRosetta(DE3)。
6.权利要求4所述的重组菌在表达多聚磷酸激酶中的应用。
7.权利要求4所述的重组菌在制备ATP中的应用，其特征在于，磷酸供体为多聚磷酸盐。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将活化的重组菌接种到LB培养基中，培养至OD600nm为0.6-0.8时，加入IPTG，IPTG的终浓度为0.1-1mM，诱导表达10-20h；离心收集菌泥，将菌泥进行超声破碎，离心得到含多聚磷酸激酶的粗酶液；
(2)在Tris-HCl缓冲体系中添加金属离子、磷酸供体和AMP，添加步骤(1)得到的粗酶液催化AMP生成ATP。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，步骤(2)中所述金属离子为Mg2+。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，步骤(2)中所述酶用量为0.02-1U/mL反应液，所述催化条件为pH5.0-10.0，10-50℃反应4-12h。
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