[发明专利]一种提高黑曲霉的纤维素酶活力的方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种提高黑曲霉的纤维素酶活力的方法，其特征在于：

该方法包括以下步骤：

步骤1)构建clp基因序列和engXCA基因序列：

所述clp基因序列包含clp基因启动子序列和clp基因的完整ORF序列；所述clp基因是大豆斑疹病菌(X.axonopodis pv.glycines)的clp基因；

所述engXCA基因序列包含engXCA基因启动子序列和engXCA基因的完整ORF序列；所述engXCA基因是大豆斑疹病菌(X.axonopodis pv.glycines)的engXCA基因；

步骤2)构建纤维素酶的表达载体：将所述步骤1)构建的所述clp基因序列和所述engXCA基因序列通过限制性内切酶、DNA连接酶作用，构建到表达载体上获得所述纤维素酶的表达载体；

步骤3)将所述步骤2)构建获得的所述纤维素酶的表达载体转化到黑曲霉中，获得重组黑曲霉菌株。

2.如权利要求1所述的提高黑曲霉的纤维素酶的酶活的方法，其特征在于：所述engXCA基因启动子序列中的第-148～-163位点的序列为5'-TGTGACCGGTGTCACA-3'，如SEQ IDNo.1所示。

3.如权利要求1所述的提高黑曲霉的纤维素酶活力的方法，其特征在于：在所述步骤1)中，clp基因启动子序列如SEQ ID No.2所示，clp基因的完整ORF序列如SEQ ID No.3所示，engXCA基因启动子序列如SEQ ID No.4或SEQ ID No.5所示，engXCA基因的完整ORF序列如SEQ ID No.6所示。

4.如权利要求1至3中任意一项所述的提高黑曲霉的纤维素酶活力的方法，其特征在于：在所述步骤2)中，所采用的表达载体为pCAMBIA1300载体。

5.如权利要求4所述的提高黑曲霉的纤维素酶活力的方法，其特征在于：在所述步骤2)中，所采用的限制性内切酶为Sma I和Xba I。

6.如权利要求5所述的提高黑曲霉的纤维素酶活力的方法，其特征在于：所述步骤3)中，将所述步骤2)构建获得的所述纤维素酶的表达载体通过PEG介导的原生质体转化到黑曲霉CICC41061菌株中，获得重组黑曲霉菌株。

7.一种提高黑曲霉的纤维素酶活力的试剂盒，其特征在于：

所述试剂盒至少包含纤维素酶的表达载体，所述纤维素酶的表达载体含有纤维素酶表达单元，所述纤维素酶表达单元为clp基因启动子序列-clp基因的完整ORF序列-engXCA基因启动子序列-engXCA基因的完整ORF序列；

所述clp基因是大豆斑疹病菌(X.axonopodis pv.glycines)的clp基因；所述engXCA基因是大豆斑疹病菌(X.axonopodis pv.glycines)的engXCA基因。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：

所述engXCA基因启动子序列中的第-148～-163位点的序列为5'-TGTGACCGGTGTCACA-3'，如SEQ ID No.1所示。

9.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：

所述clp基因启动子序列如SEQ ID No.2所示，clp基因的完整ORF序列如SEQ ID No.3所示，engXCA基因启动子序列如SEQ ID No.4或SEQ ID No.5所示，engXCA基因的完整ORF序列如SEQ ID No.6所示。

10.一种重组黑曲霉菌株，其特征在于：

所述重组黑曲霉菌株是采用如权利要求1至6中任意一项所述的方法获得的重组黑曲霉菌株。