[发明专利]疏螺旋体鞭毛蛋白FlaB抗体的获取方式及应用在审
| 申请号： | 201810756460.5 | 申请日： | 2018-07-11 |
| 公开（公告）号： | CN109134649A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 刘红旗;时宇;陆巍;李昕潼;张静;陶玉芬;刘建生 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院医学生物学研究所 |
| 主分类号： | C07K16/12 | 分类号： | C07K16/12;C07K16/06;C07K14/20;C12N15/31;C12N15/70;G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京知本村知识产权代理事务所 11039 | 代理人： | 刘江良 |
| 地址： | 650118 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 疏螺旋体 鞭毛蛋白 抗体 原核表达载体 大肠杆菌 制备和应用 组氨酸标签 获取方式 基因片段 免疫小鼠 亲和纯化 诱导表达 基因组 扩增 蛋白 克隆 转入 检测 应用 研究 | ||
1.一种疏螺旋体鞭毛蛋白FlaB的抗体制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）用鞭毛蛋白FlaB免疫小鼠；
（2）收集免疫后小鼠血清制备抗体，所述抗体用于检测螺旋体。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述鞭毛蛋白FlaB通过基因工程获得。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述鞭毛蛋白FlaB通过基因工程获得方法具体包括如下步骤：
（1）扩增疏螺旋体FlaB基因引物的设计；
（2）疏螺旋体FlaB基因的PCR扩增；
（3）疏螺旋体鞭毛蛋白FlaB基因克隆；
（4）疏螺旋体鞭毛蛋白FlaB表达和蛋白纯化，其所述用表达载体为载体pET-30a，表达系统为原核表达系统，优选为大肠杆菌。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述免疫小鼠的步骤为：
（1）取免疫前的小鼠全血制备免疫前血清，制备抗原溶液；
（2）抗原溶液与佐剂QuickAntibody–Mouse5W混合制备免疫注射药剂；
（3）通过小鼠左右大腿进行肌肉注射；其中优选采用8-12周龄Balb/c小鼠；
（4）3周后以同样方式加强免疫一次；
（5）免疫5周后收集免疫后小鼠血清制备得到的抗体。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：所述抗原溶液与佐剂QuickAntibody–Mouse5W的混合是按1：1的比例混合。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于：所述肌肉注射中，每针次100ul，抗原免疫剂量为40ug。
7.如权利要求4所述的方法，其特征在于：最后一步是将血清放入37℃培养箱处理1小时后再进行4℃过夜处理，之后在室温、8000g的条件下进行离心10分钟，所取上清即为免疫血清。
8.如权利要求1至7任一项所述的方法制备得到的抗体。
9.一种体外检测螺旋体细菌的方法，其特征在于：用如权利要求1至7任一项所述的方法制备得到的抗体，通过ELISA、Western blot，或免疫荧光方法检测螺旋体。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于：所述抗体用于检测2种不同的螺旋体，即赫母斯氏包柔氏螺旋体（Borrelia hermsii）,又能检测莱姆病螺旋体（Borreliaborgidorferi）。
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