[发明专利]一种分离纯化柑橘多甲氧基黄酮的方法

权利要求书

1.一种分离纯化柑橘多甲氧基黄酮的方法，其特征在于，采用大孔吸附树脂与制备型高效液相色谱联用的方法分离纯化出多个多甲氧基黄酮单体，包括以下步骤：

1）提取

柑橘皮渣与85%-95%（v/v）乙醇水溶液混匀，于45℃以下辅助以超声处理提取30min-2h，取上清，浓缩得粗提液；

2）富集除杂

预处理好的HPD300大孔树脂装入层析柱，将所述粗提液泵入所述层析柱，3%-10%（v/v）乙醇水溶液泵入所述层析柱水洗除杂，90%-95%（v/v）乙醇水溶液泵入所述层析柱解除吸附，收集解除吸附阶段的洗脱液，浓缩并冻干，得PMF混合物；

3）分离纯化

用甲醇或乙醇溶解所述PMF混合物，获得待纯化溶液，通过质谱引导的制备型高效液相色谱进行进一步分离纯化，待纯化溶液上样后，采用流动相梯度洗脱，按保留时间收集各馏分，浓缩并冻干，获得多甲氧基黄酮单体；

所述方法分离纯化出5种多甲氧基黄酮单体，分别为：甜橙黄酮、5,6,7,4'-四甲氧基黄酮、川陈皮素、橘皮素、5-羟基-6,7,8,3',4'-五甲氧基黄酮；

所述流动相由流动相A和流动相B组成，其中所述流动相A：体积分数为0.1%的甲酸的乙腈溶液；所述流动相B：体积分数为0.1%的甲酸的水溶液；

所述流动相的流速为15-25 mL/min；所述梯度洗脱具体为：0-6 min，流动相A 占比从18%升至30%，即流动相B 占比82%降至70%；6-35 min，流动相A 占比由30%升至42%，即流动相B 占比70%降至58%；35-45 min，流动相A 占比由42%升至60%，即流动相B 占比58%降至40%；45-50 min，流动相A 占比由60%降至18%，即流动相B 占比40%升至82%。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述制备型高效液相色谱采用XBridgePrep RP18制备柱。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3）所述待纯化溶液过柱前过0.22μm亲水PTFE滤膜。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2）所述层析柱为规格为22 × 300 mm的玻璃层析柱。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤2）所述粗提液的上样浓度为8.7mg/mL。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤2）所述粗提液的上样流速为4BV/h。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤2）所述解除吸附流速为4 BV/h。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1）所述于45℃以下辅助以超声处理的提取过程重复1-3次。