[发明专利]一种分离纯化柑橘多甲氧基黄酮的方法

说明书

本发明属于化合物提取及纯化技术领域，具体涉及一种分离纯化柑橘多甲氧基黄酮的方法。本发明采用大孔吸附树脂与制备型高效液相色谱联用的方法分离纯化出多个多甲氧基黄酮单体，包括粗提、大孔吸附树脂富集除杂和制备型高效液相色谱纯化得单体的过程。本发明的方法提取的杂质大大减少，目标成分含量增加，分离纯化效率较高，能同时分离纯化出5个PMFs单体且单体纯度95％以上，使用的溶剂安全无毒副作用且能有效回收。

技术领域

本发明属于化合物提取及纯化技术领域，具体涉及一种分离纯化柑橘多甲氧基黄酮的方法。

背景技术

柑橘富含黄酮类物质，其中的多甲氧基黄酮(PMFs)是柑橘中所特有的，川陈皮素(Nobiletin)、桔皮素(Tangeretin)是其中的代表，它们主要分布在柑橘皮的油胞中，含量在0.4～0.6mg/g。这类物质由于其具有平面结构，含有多个甲氧基，极性低，因此具有多种药理作用如抗癌、抗炎、抗氧化、抗诱变以及降低胆固醇等作用，特别其在抗癌方面的作用要比其它黄酮类强。

目前，提取PMFs的方法主要为有机溶剂提取法(浸渍法)、超临界流体萃取、酶解法、微波辅助提取等方法。目前方法仍存在杂质的共提取问题，提取效率不高等问题。因此，粗提物的杂质多、目标物质含量低，提取效率亟待改善。

而分离纯化主要依靠溶剂萃取、薄层色谱(TLC)、高速逆流色谱(HSCCC)和制备型高效液相色谱(prep-HPLC)等方式，步骤繁琐，有机溶剂难以回收。还有是采用聚酰胺柱和葡聚糖凝胶柱两次纯化柑橘皮粗提物，虽然得到的多甲氧基黄酮含量也较高，但是分离工序较复杂，而且这两种分离介质价格也较昂贵。

目前PMF单体分离纯化中存在杂质提取多、步骤繁琐、有机溶剂难回收等问题。

因此，本发明针对这一现状，根据多甲氧基黄酮的特性设计出大孔吸附树脂(MAR)与prep-HPLC联用的方法分离纯化柑橘中的PMFs，与现有方法相比，本发明的方法提取的杂质大大减少，目标成分含量增加，能同时分离纯化出多个PMFs单体、使用的溶剂安全无毒副作用且能有效回收。

发明内容

目前PMF单体分离纯化中存在杂质提取多、步骤繁琐、有机溶剂难回收等问题。因此可以在PMF单体纯化前增加去杂质的过程。

大孔树脂(MAR)是一种多孔的聚合物吸附剂，通过选择适宜的树脂可以对目标分离物具有较好的吸附作用，然后通过适宜的洗脱剂洗脱下来达到富集除杂的目的，它具有成本低廉，易得，组装简单，分离效果好的优点。可用于粗体物的去杂。

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种分离纯化柑橘多甲氧基黄酮的方法，该方法提取的杂质大大减少，目标成分含量增加，能同时分离纯化出多个PMFs单体，使用的溶剂安全无毒副作用，能有效回收。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

一种分离纯化柑橘多甲氧基黄酮的方法，其采用大孔吸附树脂与制备型高效液相色谱联用的方法分离纯化出多个多甲氧基黄酮单体，包括以下步骤：

1)提取

柑橘皮渣与85％-95％(v/v)乙醇水溶液混匀，45℃以下辅助以超声处理提取30min-2h，取上清，浓缩得粗提液；

2)富集除杂

预处理好的HPD300大孔树脂装入层析柱，将所述粗提液泵入所述层析柱，3％-10％(v/v)乙醇水溶液泵入所述层析柱水洗除杂，90％-95％(v/v)乙醇水溶液泵入所述层析柱解除吸附，收集解除吸附阶段的洗脱液，浓缩并冻干，得PMF混合物；

3)分离纯化

用色谱级甲醇或乙醇溶解所述PMF混合物，获得待纯化溶液，通过质谱引导的制备型高效液相色谱进行进一步分离纯化：待纯化溶液上样后，采用流动相梯度洗脱，按保留时间收集各馏分，浓缩并冻干，获得多甲氧基黄酮单体；