[发明专利]一种真菌漆酶表达菌株及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种真菌漆酶表达菌株，其特征在于：是在栓菌 AH28-2中过表达热激蛋白ThHspA1后获得的菌株Trametes hirsuta AH28-2（ThHspA1-5）；

所述真菌漆酶表达菌株的分类命名为：Trametes hirsuta AH28-2(ThHspA1-5)，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，保藏日期：2018年6月12日，保藏编号：CCTCC NO：M 2018329。

2.根据权利要求1所述的真菌漆酶表达菌株，其特征在于：

所述栓菌 AH28-2的分类命名为：Trametessp. AH28-2，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，保藏日期：2015年11月29日，保藏编号：CCTCC NO：M205134。

3.一种权利要求1-2中任一种真菌漆酶表达菌株的应用，其特征在于：是以所述真菌漆酶表达菌株发酵制备漆酶。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于包括如下步骤：

将构建的真菌漆酶表达菌株接种于PDA培养基平板进行活化，即在保藏斜面上取直径0.5cm的菌丝块，接种于PDA培养基平板中心位置，置于28℃恒温培养，待菌丝边缘生长至距培养皿边缘1cm时，活化完成；在活化好的平板上取6块直径0.5cm的菌丝块，接种于100mL的纤维二糖-天冬酰胺液体培养基中，于28℃、120 rpm的摇床中进行摇瓶培养，培养96 h后匀浆2次，接种到400mL纤维二糖-天冬酰胺液体培养基中，于28℃、120 rpm条件下进行液体发酵培养，培养96-108h后通过离心去除菌体的方法制得发酵液，纯化后获得漆酶。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：

所述PDA培养基以500mL计，配方如下：10g葡萄糖，1.5g KH₂PO₄，0.75g MgSO₄·7H₂O，20mg VB₁，7.5g 琼脂，10%土豆滤出液，定容至500 mL，115℃，高压灭菌30 min。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：

所述纤维二糖-天冬酰胺液体培养基以500mL计，配方如下：0.5g蛋白胨，7.5g纤维二糖，0.05g Na₂HPO₄·12H₂O，0.05g KH₂PO₄，0.75g L-天冬酰胺，0.005g FeSO₄·7H₂O，0.005gCaCl₂，25μg VB₁，0.001g CuSO₄，0.014g腺嘌呤，定容至500 mL，115℃高压灭菌30 min。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：

接种到400mL纤维二糖-天冬酰胺液体培养基中的接种量按体积比为5%。