[发明专利]PD-1特异性干扰序列、质粒、减毒沙门氏菌及在抗肿瘤的应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种PD‑1特异性干扰序列、质粒、减毒沙门氏菌及在抗肿瘤的应用。所述PD‑1特异性干扰序列为序列1、序列2或者序列3；其中序列1的正义链如SEQ ID NO.1所示，反义链如SEQ ID NO.2所示，序列2的正义链如SEQ ID NO.3所示，反义链如SEQ ID NO.4所示，序列3的正义链如SEQ ID NO.5所示，反义链如SEQ ID NO.6所示。所述PD‑1特异性干扰质粒是将PD‑1特异性干扰序列连接入pGCSilencer neo2.0‑U6质粒后制得的。利用构建的减毒沙门氏菌运载PD‑1特异性干扰质粒来治疗肿瘤，将为临床上肿瘤的治疗提供新的策略及制剂，并产生极大市场经济效益。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种PD-1特异性干扰序列、质粒、减毒沙门氏菌及在抗肿瘤的应用。

背景技术

据《中国肿瘤登记年报》报告显示，每年新发病例为312万人，死亡近200万，过去30年中国癌症死亡率增加80％，成为中国城市居民的第一位死因和农村居民的第二位死因。美国2014年的统计显示，世界范围内男性发病位居前两位的分别是前列腺癌和肺癌，女性发病位居前两位的分别是乳腺癌和肺癌。而随着现代环境的变化，特别是雾霾的增加，肺癌的发病率呈现明显的上升趋势。癌症不仅成为危害中国居民健康最重要的疾病之一，其带来的经济负担和对社会发展的不良影响日益突显。我国现每年用于癌症治疗的医疗费用多达数千亿元，且呈现逐年上升趋势。然而，即使花费了大量的财力，中晚期的肿瘤病人依然很难治愈。

PD-1/PD-L在肿瘤免疫检查点治疗肿瘤方面取得了重大的进展，1992年，陈列平提出了肿瘤微环境中存在“免疫逃逸关键分子”的假设。PD-1(programmed death 1)程序性死亡受体1，是一种重要的免疫抑制分子。PD-1主要在激活的T细胞和B细胞中表达，肿瘤细胞会高表达PD-1的配体：PD-L1和PD-L2，受体和配体结合时导致对免疫细胞激活的抑制。肿瘤微环境会诱导浸润的T细胞高表达PD-1分子，导致肿瘤微环境中PD-1通路持续激活，T细胞功能被抑制，无法杀伤肿瘤细胞。抗人PD-1单克隆抗体可以阻断这一通路，恢复T细胞的功能，使这些细胞能够继续杀伤肿瘤细胞。1999年至2002年间，他发明了用抗体封闭PD-1/PD-L1结合来增强免疫反应，并在动物实验证明了该抗体能够成功的治疗肿瘤。这些发现为目前抗肿瘤免疫逃逸提供了新的治疗方法，从而奠定了单克隆抗体治疗肿瘤的理论基础。基于这个原理设计的用于阻断PD-1和PD-L1结合的抗体治疗(简称抗PD-1治疗)已经在成千上万的癌症病人身上使用，并证实在十余种晚期癌症，包括肺癌、肾癌、黑色素瘤、头颈癌、膀胱癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、食管癌、脑胶质瘤、结肠癌、何杰金氏淋巴瘤等有显著疗效，PD-1治疗是目前最有效的免疫治疗方法。

目前，抑制PD-1通路已经成为了肿瘤免疫治疗中一个非常重要的免疫检查点。应用单克隆抗体抑制PD-1通路能够有效的治疗包括黑色素瘤在内的多种肿瘤，但众所周知，信号通路的抑制除了应用单克隆抗体外，也可以直接干扰其基因的表达。RNAi已成为遗传学领域和基因治疗学领域中的重要核心课题。其方法是通过长度为21-25nt的双链小干扰RNA以碱基互补配对方式，特异地降解靶目标RNA(mRNA)，从而消除该靶标RNA的功能，阻断其调控作用或阻断其对应蛋白的合成。RNA干扰现象的发现，极大激发了核酸生物制药技术的研究热度。但是，目前尚未发现可以抑制PD-1通路的小干扰RNA序列。

发明内容

本发明提供的一种PD-1特异性干扰序列、质粒、减毒沙门氏菌及在抗肿瘤的应用，开发了一种可以抑制PD-1通路的小干扰RNA序列。

本发明提供了一种PD-1特异性干扰序列，所述PD-1特异性干扰序列为序列1、序列2或者序列3；其中序列1的正义链如SEQ ID NO.1所示，反义链如SEQ ID NO.2所示，序列2的正义链如SEQ ID NO.3所示，反义链如SEQ ID NO.4所示，序列3的正义链如SEQ ID NO.5所示，反义链如SEQ ID NO.6所示。