[发明专利]一种虫草精多糖在制备用于抗革兰氏阴性植物病原细菌药剂中的用途

权利要求书

1.一种95％乙醇醇沉虫草精多糖CP95在制备用于抗革兰氏阴性植物病原细菌药剂中的用途，其特征在于，所述CP95是利用虫草培养物制备得到；

所述CP95的制备方法包括如下步骤：

(1)粗多糖提取：取适量虫草培养物于70℃烘干，按照培养物质量与提取液体积比加入10倍量50％乙醇，于80℃提取两次，每次搅拌0.5h，保温2h，过滤得到50％乙醇提取液；50％乙醇两次提取后的滤渣中加入10倍量水溶液，于100℃提取，搅拌0.5h，保温1h，过滤得到水提取液；将50％乙醇提取液和水提液分别浓缩，得到50％醇提浓缩液和水提浓缩液；两种浓缩液分别加入3倍量95％乙醇，静置过夜，沉淀多糖，分别得到50％醇提沉淀多糖和水提沉淀多糖；合并50％醇提沉淀多糖和水提沉淀多糖，喷雾干燥，得到虫草粗多糖；

(2)粗多糖脱蛋白：用去离子水溶解粗多糖，将配制的粗多糖溶液上样于大孔树脂，用3倍体积去离子水进行洗脱，收集洗脱液；将收集的洗脱液与Sevag试剂按体积比5:1混合均匀，剧烈振荡30min，于4000rpm离心15min，置于分液漏斗分液除去中间变性蛋白层与下层有机溶液层，重复上述操作2次；水相层浓缩得到精多糖CP；

(3)乙醇分步醇沉：精多糖浓缩液用体积比终浓度为50％乙醇搅拌均匀，4℃静置过夜，8000r/min离心15min，收集沉淀物，低温冻干沉淀得到CP50；上清液调节乙醇体积至75％，4℃静置过夜，8000r/min离心15min，收集沉淀物，低温冻干沉淀得到CP75；上清液浓缩旋干，用95％乙醇进行溶解，4℃静置过夜，8000r/min离心15min，收集沉淀物，低温冻干沉淀得到CP95；

或者，所述CP95的制备方法包括如下步骤：

(1)粗多糖提取：取适量虫草培养物于70℃烘干，按照培养物质量与提取液体积比加入10倍量50％乙醇，于80℃提取两次，每次搅拌0.5h，保温2h，过滤得到50％乙醇提取液；50％乙醇两次提取后的滤渣中加入10倍量水溶液，于100℃提取，搅拌0.5h，保温1h，过滤得到水提取液；将50％乙醇提取液和水提液分别浓缩，得到50％醇提浓缩液和水提浓缩液；两种浓缩液分别加入3倍量95％乙醇，静置过夜，沉淀多糖，分别得到50％醇提沉淀多糖和水提沉淀多糖；合并50％醇提沉淀多糖和水提沉淀多糖，喷雾干燥，得到虫草粗多糖；

(2)粗多糖脱蛋白：用去离子水溶解粗多糖粉末，将配制的粗多糖溶液与Sevag试剂按体积比5:1混合均匀，剧烈振荡30min，于4000rpm离心15min，置于分液漏斗分液除去中间变性蛋白层与下层有机溶液层，重复上述操作3次；将Sevag法处理后的水相层上样于大孔树脂，用3倍体积去离子水进行洗脱，水相浓缩得到精多糖CP；

(3)乙醇分步醇沉：精多糖浓缩液用体积比终浓度为50％乙醇搅拌均匀，4℃静置过夜，8000r/min离心15min，收集沉淀物，低温冻干沉淀得到CP50；上清液调节乙醇体积至75％，4℃静置过夜，8000r/min离心15min，收集沉淀物，低温冻干沉淀得到CP75；上清液浓缩旋干，用95％乙醇进行溶解，4℃静置过夜，8000r/min离心15min，收集沉淀物，低温冻干沉淀得到CP95；

所述革兰氏阴性植物病原细菌为水稻细菌性褐条病RS-1菌株、番茄青枯病MYA-1菌株或甘薯茎腐病Dd-1菌株。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述虫草培养物包括蝉花虫草、冬虫夏草或蛹虫草虫草培养物。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述虫草培养物包括培养残基、子实体、液体发酵菌丝体或液体发酵菌丝体滤液。