[发明专利]一种塞尼卡谷病毒非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种塞尼卡谷病毒非结构蛋白3ABC抗体的ELISA检测试剂盒。该试剂盒包括塞尼卡谷病毒非结构蛋白3ABC抗原包被的酶标板、阳性对照血清、阴性对照血清、酶标抗体，样品稀释液，显色液、终止液以及浓缩洗涤液。所述塞尼卡谷病毒非结构蛋白3ABC的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明所述的试剂盒使用原核表达系统表达的非结构蛋白3ABC抗原包被反应板，抗原用量少，可以高效地检测猪血清中是否存在塞尼卡谷病毒，且与猪水疱病毒、猪瘟病毒和猪圆环病毒‑2型不反应。本发明试剂盒特异性好、敏感、高效，具有良好的市场前景。

技术领域

本发明涉及一种塞尼卡谷病毒非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测试剂盒及其检测方法。本发明属于病毒检测技术领域。

背景技术

猪塞尼卡谷病是由塞尼卡谷病毒(Seneca Valley virus,SVV)引起的一种猪原发性疱疹病。该病主要引起猪口鼻黏膜及蹄部出现水泡和溃疡。2008年和2012年，美国、加拿大等部分地区在发病猪群中诊断出SVV，2015年9月，美国某种猪场猪群出现跛足、水泡且伴随初生仔猪死亡，PCR检测排除口蹄疫病毒(FMDV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪呼吸与繁殖综合症病毒(PRRSV)的感染，发病猪的血清、皮肤、粪便、蹄部冠状带的PCR检测结果显示为SVV阳性，最终被确诊为SVV感染。同年，我国广东省某猪场相继发生水疱性疾病，母猪发烧厌食、口鼻及蹄部出现水泡，传播速度快，并伴有产房仔猪急性死亡，经检测FMD、SVD、VS检测结果为阴性，SVV显示为阳性，随后分离出了一株SVV毒株(CH-01-2015)，这是中国首次报道有猪感染SVV。虽然猪塞尼卡谷病不会造成与口蹄疫病毒相同的重大经济损失，但是该病对于新生仔猪也有较高的致死率，其临床症状与口蹄疫、猪水泡病、水泡性口炎等高度相似，给鉴别和区分该病带来了一定的困难，目前，尚无有效的疫苗和诊断试剂用于防控SVV。因此，研制出相应的疫苗和鉴别诊断试剂来预防和诊断猪塞尼卡谷病具有重要意义。

SVV基因组全长约7.2kb，包括5′-U TR、3′-UTR、1个开放阅读框(ORF)以及3′末端poly(A)尾，研究表明，SVV的RNA编码1个长为2181个氨基酸的多聚蛋白，该多聚蛋白可进一步水解为前导蛋白L、结构蛋白P1，非结构蛋白P2和P3，P1进一步被P3前体蛋白中具有蛋白酶活性的3C和一些可能的细胞内切酶切割分解为VP0、VP1和VP3三种结构蛋白。对于猪塞尼卡谷病的诊断来说，检测非结构蛋白或其抗体可以有效区分疫苗免疫动物与野毒感染动物。

本发明以非结构蛋白3ABC作为候选基因，克隆获得SVV的3ABC基因，以大肠杆菌中表达并纯化3ABC蛋白作为包被抗原，建立SVV的非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测试剂盒，为今后应对SVV的可能疫情，提前做好技术储备具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性好、灵敏度高的塞尼卡谷病毒非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测试剂盒，旨在解决上述背景技术中，目前尚无有效的、快速的鉴别诊断试剂用于SVV的防控的问题，为今后提前应对SVV的可能疫情做好技术储备。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术手段为：

本发明的一种塞尼卡谷病毒非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测试剂盒，其包括塞尼卡谷病毒非结构蛋白3ABC抗原包被的酶标板，阳性对照血清，阴性对照血清，酶标抗体，样品稀释液，显色液、终止液以及浓缩洗涤液。

其中，优选的，试剂盒保存在4℃冰箱中。

其中，优选的，所述塞尼卡谷病毒非结构蛋白3ABC抗原经原核表达系统获得，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

其中，优选的，所述的塞尼卡谷病毒非结构蛋白3ABC抗原包被的酶标板按照以下方法制备得到：

(1)包被抗原的制备和包被