[发明专利]分离红霉素B的方法以及制备红霉素B对照品的方法

权利要求书

1.一种分离红霉素B的方法，其特征在于，包括：

将红霉素样品进行高效液相色谱分离，以便获得红霉素B；

其中，所述高效液相色谱分离的条件如下所示：

色谱柱：DAC-HB100，填料ACCHROM C18TDE(100*250mm,10um)；

色谱柱温度：室温；

流动相：0.01～0.02mol/L磷酸氢二钾-乙腈，所述0.01mol/L磷酸氢二钾和乙腈的体积比为50:50～50：55，所述磷酸氢二钾预先溶于水中；

流速：450～470mL/min；

等度洗脱；

检测波长215nm。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述红霉素样品中红霉素B的含量为不小于5％。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述红霉素样品预先进行溶解和过滤处理；

任选地，所述红霉素样品预先溶于甲醇中，浓度为1g/mL；

任选地，所述过滤处理是将溶解后的红霉素样品经过0.45μm的有机滤膜进行的。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述红霉素样品的上样量为20mL。

5.一种制备红霉素B对照品的方法，其特征在于，

1)利用权利要求1～4任一项所述的方法从红霉素样品中分离红霉素B；

2)将步骤1)获得的红霉素B进行一次萃取处理；

3)将萃取产物进行重结晶处理，以便获得所述红霉素B对照品。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述萃取处理是通过将所述步骤1)获得的红霉素B与二氯甲烷进行接触进行的；

任选地，所述步骤1)获得的红霉素B是以含有红霉素B的流分的形式存在的，所述红霉素B的流分与所述二氯甲烷的体积比为1L:(90～100)mL；

任选地，萃取处理后进一步包括将萃取处理产物的有机层进行旋转蒸干处理，以便获得红霉素B粗品；

任选地，所述旋转蒸干处理是在40℃～45℃的条件下进行的。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述重结晶处理是通过如下方式进行的：

将所述萃取产物溶解在乙醇溶液中；以及

将溶解在乙醇溶液中的萃取产物进行析出处理，析出产物构成所述红霉素B对照品；

任选地，所述乙醇溶液的浓度为70％～80％；

优选地，将所述萃取产物溶解在70℃～80℃的所述乙醇溶液中；以及

将溶解在乙醇溶液中的萃取产物在0℃～5℃的条件下进行析出处理。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，进一步包括将析出产物在60～65℃的烘箱中进行烘干处理；

任选地，析出处理之后，烘干处理之前，进一步包括将析出处理产物进行过滤处理。

9.一种制备红霉素B对照品的方法，其特征在于，

1)将红霉素样品进行甲醇溶解和0.45μm的有机滤膜过滤处理，所述红霉素样品中红霉素B的含量为不小于5％，所述红霉素样品在甲醇中的浓度为1g/mL；

2)将步骤1)获得滤液进行高效液相色谱分离，以便获得含有红霉素B的流分，

其中，上样量为20mL，所述高效液相色谱分离的条件如下所示：

色谱柱：DAC-HB100，填料ACCHROM C18TDE(100*250mm,10um)；

色谱柱温度：室温；

流动相：0.01～0.02mol/L磷酸氢二钾-乙腈，所述0.01mol/L磷酸氢二钾和乙腈的体积比为50:50～50：55，所述磷酸氢二钾预先溶于水中；

流速：450～470mL/min；

等度洗脱；

检测波长215nm；

高效液相色谱分离系统在上述条件下平衡5～6min；

3)将含有红霉素B的流分进行二氯甲烷萃取处理，所述含有红霉素B的流分与所述二氯甲烷的体积比为1L:(90～100)mL，取萃取处理后的有机层在40℃～45℃的条件下进行旋转蒸干处理，以便获得红霉素B粗品；

4)将所述红霉素B粗品溶解在70℃～80℃的浓度为70％～80％的乙醇溶液中，并将溶解有红霉素B粗品乙醇溶液在0℃～5℃的条件下进行析出处理，并将析出产物进行过滤以及在60～65℃的烘箱中进行烘干处理，以便获得红霉素B对照品。