[发明专利]LC-MS/MS法测定（E）3;4;5-三甲氧基肉桂酰氯的方法

说明书

本发明属于药物杂质分析领域，具体公开了一种LC‑MS/MS法测定（E）3,4,5‑三甲氧基肉桂酰氯的方法，具体为：利用(E)3，4，5‑三甲氧基肉桂酰氯与二乙胺能定量反应生成稳定化合物(E)N，N‑二甲基‑3，4，5‑三甲氧基肉桂酰胺的原理，对衍生化后的生成物进行液相色谱串联质谱分析。色谱柱：Agilent Poroshell 120 EC‑C18(100×2.1mm，2.7μm)；流动相：甲醇‑0.1％甲酸(V/V，50∶50)；流速：0.4ml/min；柱温：35℃；进样体积：5μl；离子源：电喷雾离子化源(ESI)；检测方式：正离子多反应监测模式，(E)N，N‑二甲基‑3，4，5‑三甲氧基肉桂酰胺的监测离子对分别为m/s 294.0/221.0和294.0/190.0。该方法专属性强、检测限低、稳定性好，回收率高可用于马来酸桂哌齐特生产过程中中杂质(E)3，4，5‑三甲氧基肉桂酰氯的质量控制。

技术领域

本发明属于药物杂质分析领域，具体公开了一种马来酸桂哌齐特中杂质(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的分析方法。

背景技术

马来酸桂哌齐特化学名称为(E)1-[(吡咯烷羰基)甲基]-4-(3，4，5-三甲氧基肉桂酰基)哌嗪顺丁烯二酸盐，商品名为克林澳，为哌嗪类钙离子拮抗剂^[1]，具有多种药理作用，如腺苷增效作用^[2]、扩血管作用^[3]、改善血液流变学^[4]，广泛用于心心治疗脑血管疾病^[5～9]，1970年由法国Sanofi-Anentis公司最先生产，并在欧洲、日本等发达国家广泛应用，2002年在中国上市^[1]。

马来酸桂哌齐特的合成路线主要有四条，其主流使用的合成方法中均用到了(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯作为中间反应的原料^[10，11]，而(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯有基因毒性警示结构，结构式见式1。

式1(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯结构式

对马来酸桂哌齐特中(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的限量控制的研究十分重要，有关痕量酰氯类化合物的检测方法主要有液相色谱法^[12，13]、气相色谱法^[14，15]等，由于酰氯的高反应活性，它能与正相色谱柱和反相色谱柱流动相中的水或醇发生酯化或水解分析，关于(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的检测报道仅有刘华祥^[16]通过衍生反应建立了反高效液相色谱法测定(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯原料纯度的方法，衍生反应式见方程式1。

方程式1(E)N，N-二甲基-3，4，5-三甲氧基肉桂酰胺的合成反应式

参照欧洲药品管理局(EMA)、美国食品药品管理局(FDA)及人用药品注册技术要求国际协调会(ICH)颁布的基因毒性杂质控制的指导文件，推荐以毒理学关注阈值(TTC，1.5μg/天)来控制用药风险。在EMA关于基因毒性杂质限度指南的问答中指出，在结构相似的情况下，基因毒性杂质的作用模式一致，并具有相同的分子靶向，在这种情况下，建议基因毒性杂质的总和为1.5μg/天，以马来酸桂哌齐特日剂量320mg/天计算，(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯的限度＝1.5ug/天/320mg/天＝4.6mg/kg，EMA关于基因毒性杂质限度指南的问答中同时指出，如果在最后一步合成前，实际生成或引入了一个(潜在)基因毒性杂质，可以不将其纳入原料药质量标准中，但是必须保证该杂质在合成中间体中有合理的控制限度并且在原料药检测结果中明确其含量不超过来源于TTC或其他认可标准的30％，即4.6mg/kg×30％＝1.38mg/kg。

然而，现有对于检测桂哌齐特中残留的痕量(E)3，4，5-三甲氧基肉桂酰氯达不到检出限要求，不能达到质量监控的目的。

参考文献